产漆酶白腐菌的诱变选育及其液体发酵的研究 mutational screening of white rot fungi for laccase production in liquid cultivation.pdfVIP

《造纸科学与技术》2009年第28卷第5期 产漆酶白腐菌的诱变选育及其液体发酵的研究水 傅 恺 付时雨 李雪云 詹怀宇 (华南理工大学制浆造纸工程国家重点实验室，广东广州510640) 摘要：本研究从一株产漆酶的野生白腐菌出发，通过紫外诱变技术处理，获得了一株产漆酶能力较强的诱变菌 株，其酶活高峰可达4630U／L，比原始菌株提高了约3倍。对诱变菌株液体发酵产酶的研究表明，碳源和氮源等营 养物质的消耗对菌体保持生长和代谢活力具有较大的影响，而在培养体系中漆酶活力显著升高阶段，体系pH值的 变化曲线则出现了一个明显的低谷。 关键词：白腐茵；漆酶；紫外诱变；营养物质；pH 中图分类号：Q814 文献标识码：A 文章编号：J67l一4571(2009)05-0021-04 条件仍然是提高漆酶产量的一条重要途径和今后一 1 前言 段时期内的研究重点。 自然界中木质素的完全降解主要是通过白腐真 紫外线是一种使用最早、沿用最久、效果明显的 菌的分解作用来完成的。白腐菌降解木质素，是通 物理诱变方法。它能够使DNA链上的碱基之间形 过分泌胞外氧化酶——木质素降解酶来实现的，其 成嘧啶二聚体，影响复制过程中碱基的正常配对，从 中木素过氧化物酶(LiP)、依赖锰过氧化物酶而使生物体产生突变，因此其诱变频率较高，而且不 (MnP)、和漆酶(Laccase)是白腐菌木素降解酶系的易回复。它在工业微生物育种史上曾经发挥过重要 主要组成部分…。 的作用，迄今仍然是微生物育种中最常用和有效地 oxidase，EC1．10．3．2)是一诱变剂之一旧】。本文通过对一株产漆酶的野生白 漆酶(P—diphenol 种含铜的多酚氧化酶，和植物中的抗坏血酸氧化酶、 腐菌HLS一20进行紫外诱变处理，经初筛、复筛得 哺乳动物的血浆铜蓝蛋白属铜蓝氧化酶家族中的同 到了一株漆酶产量较高的突变株U10一11，并对其 一小族，在结构和功能上存在有许多相似之处。它 液体培养发酵产酶进行了研究。 可以催化氧化酚类化合物脱去羟基上的电子或质 2材料与方法 子，形成自由基，导致酚类及木素类化合物降解，同 时分子氧被还原为水口1。目前已知漆酶广泛的存 2．1 菌种 在于担子菌、子囊菌和半知菌中，而且近几年的文献 采自南方森林的野生白腐菌HSL一20，具有产 报道部分细菌也具有分泌漆酶的能力∞’4】，但是到 漆酶能力，经分离筛选后于4E下保存在PDA斜面 目前为止漆酶最主要的生产者仍然是担子菌。 培养基中。 多年来，许多研究人员已对漆酶及其产生菌进 2．2 培养基 行了较为广泛的研究，主要涉及到菌株的生长特性、 PDA培养基：每L马铃薯浸出液中加入无水葡 漆酶的合成调控b’6】、酶的分离纯化和酶学性质n’8】 萄糖209，琼脂209。 等多个方面。但是由于大多数白腐菌属于担子菌， 发酵培养基：每L马铃薯浸出液中加入无水葡 39， 好氧，生长速度较慢，产酶周期长，而且发酵条件比 萄糖209，蛋白胨19，KH2P0439，MgSO．。7H20 较苛刻，影响因素较多，限制了漆酶的工业化生产和 愈创木酚0．29，麦麸lOg。 直接应用。因此选育新的漆酶产生菌，优化其产酶 PDA一愈创木酚初筛培养基：愈创木酚浓度为 作者简介：傅恺，男，在读硕士研究生，从事制浆造纸生物技术的研究。 ·基金项目：国家自然科学基金(3