一株腹泻兔魏氏梭菌的分离鉴定及诊断研究.pdfVIP

· 14 · 《上海畜牧兽医通讯》 2014年第 1期 一 株腹泻兔魏氏梭菌的分离鉴定及诊断研究 沈 玉风 (山东安丘市畜牧局 山东 安丘 262100) 【摘要】从 山东青岛某兔场病死兔中分离到一株致病菌，经厌氧培养、茵落形态学观察 、培养特 性、生化反应、小白鼠毒力试验 、分子生物学试验 ，结果表 明，该病原茵为 A型魏 氏梭菌，对小白鼠 具有较强的致病力。研究表明，利用多重PCR方法诊断兔魏 氏梭茵病 ，具有很高的特异性和敏感 性 ，可作为一种快速 、简便 的鉴定方法。 关键词 ：兔魏 氏梭茵；多重聚合酶链反应 (PCR)；分 离鉴定 魏 氏梭菌(Clostridiumwelchii)，又称产气荚膜 1．2 方 法 梭状芽孢杆菌 (Clostridiumperfringens)，是 由英 国 1．2．1 细菌分离培养 ：(1)无菌操作钩取病死兔的肝 人 Welchii和 Nuttad(1982)首先从一个腐败的人尸 脏，接种于 1 葡萄糖 5 绵羊血琼脂平板中，厌氧培 体 中所产生气泡 的血管 中分离得到，并 以we1chii 养24h，再通过 1 葡萄糖 596／绵羊血琼脂平板、含铁 的姓命名为魏 氏梭菌。兔魏 氏梭菌病又称兔产气 牛乳培养基进行纯化、鉴定。(2)取肠内容物 ，划线接 荚膜梭菌病 ，是由A型魏氏梭菌及其毒素 引起的一 种于5 绵羊血琼脂平板和 TSC选择鉴别培养基 (胰 种 以剧烈腹泻为特征的急性、致死性传染病 。该病 蛋白胨一亚硫酸铁一环丝氨酸培养基)中；在 YQX型 死亡率高，由于诊断不及时，治疗效果不好 ，发生后 厌氧培养箱中41℃厌氧培养24h。选择可疑单个菌 常常给养殖场造成重大的经济损失。q 。 落，涂片、镜检，通过 1 葡萄糖 5 绵羊血琼脂平板 、 1 材料与方法 含铁牛乳培养基进行纯化、鉴定。(3)取灭菌棉签沾 取大肠内容物，接种于5mLFTG(液体硫乙醇钠)肉 1．1 材料 汤培养基中，10倍稀释，取 10 、10 、10 三个稀释 1．1．1 病料 ：采集 自山东青岛的某养兔场，经流行 度各 i00gL接种于TSC培养基上，均匀涂开，4l℃ 病学调查、临床症状和病变特征初步诊断为魏 氏梭 厌氧培养 24h，选择黑色、单个菌落分离培养 ，再通过 菌感染 ，无菌采集病死兔心、肝、肺、肾、小肠等组织 1 葡萄糖 5 绵羊血琼脂平板、含铁牛乳培养基进 器官。 行纯化、鉴定。挑直径 2mm、四周有双溶血圈、单个 1．1．2 实验材料及试剂：血一葡萄糖一琼脂 、FTG 菌落进行纯培养 。 肉汤培养基 、硫酸亚铁牛乳培养基、革兰氏染色液、 1．2．2 显微镜检查 ：取病料进行革兰 氏染色 ，然后 生化反应管 ，由本实验室配置 ；实验用小 白鼠，购 自 进行显微镜检查 。 山东省生物制 品中心；TaqDNA 聚合酶、DL2000 1．2．3 生化实验 ：用灭菌棉拭子沾取少量 API-20E Marker和 dNTP，均购 自TaKaRa公司 ；溶菌酶 ，购 生化系统鉴定专用稀释液，在