pcDNA3．1（＋）-SAA真核表达载体构建、转染及其对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响.pdfVIP

山东医药2013年第 53卷第 47期 pcDNA3．1(+)一SAA真核表达载体构建、转染 及其对人鼻咽癌细胞 CNE一2增殖的影响 江青山，肖桃源，邓文蓉，沈宝茗 (南华大学附属第一医院，湖南衡阳421001) 摘要：目的 构建pcDNA3．1(+)一血清淀粉样蛋白A(SAA)真核表达载体，观察其在人鼻咽癌细胞CNE-2中 的表达及对CNE-2增殖的影响。方法 以CNE-2细胞的cDNA为模板，通过PCR扩增得到SAA片段，经酶切、纯 化后与pcDNA3．1(+)连接；重组质粒经酶切分析及测序鉴定后 ，用脂质体转染法转染人鼻咽癌细胞 CNE-2，用 Westernblot法检测转染前后该细胞中SAA蛋白的表达，并用MTr法检测转染重组质粒后的细胞增殖情况。结果 pcDNA3．1(+)一SAA经酶切、测序鉴定完全正确，真核表达载体构建成功；转染pcDNA3．1(+)．SAA真核表达载 体后CNE一2细胞中SAA蛋白表达水平明显高增高；转染 pcDNA3．1(十)-SAA后CNE-2细胞增殖速度加快。结论 成功构建pcDNA3．1(+)一SAA真核表达载体，其能稳定表达于人鼻咽癌细胞 CNE-2并促进细胞增殖；此为进一 步研究SAA的生物学功能及鼻咽癌的新型治疗方法奠定了基础。 关键词：pcDNA3．1(+)一血清淀粉样蛋白A；CNE-2细胞；转染；增殖 doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2013．47．003 中图分类号：R739．6 文献标志码：A 文章编号：1002-266X(2013)47--0008-03 ConstructionandtansfectionofpcDNA3．1(+)-SAAeukaryoticexpressionvector anditseffectonCNE-2cellproliferation JIANGQing—shan，XIAOTao—yuan，DENGWen—rong，SHENBaoming ( eFirstAffiliatedHospitalofUniversityofSouthChina，Hengyang421001，China) Abstract：0bjective ToconstructaneukaryoticexpressionvectorpcDNA3．1(+)-serumamyloidA(SAA)andto detectitsexpressioninCNE-2cellsandtheinfluenceofitsexpressiononCNE-2cellproliferation．Methods HumanSAA genewasamplifiedbyPCRwithCNE-2ScDNA asthetemplateandthefragmentwascombinedwithplasmidpcDNA3．1 (+)．TherecombinantexpressionvectorpcDNA3．1(+)一SAAwastransfectedintoCNE-2cellbyusingLipofectamin． TheexpressionlevelofSAA genebe~reandaftertransfectionwasdetectedbyWestern blotting．Theinfluenceofitsex— pressiononCNE-2cellproliferationwasfurtheranalyzedthroughMTI．Results Afteridentificationbyrestrictionenzyme digestionandsequencing，theeukaryotieexpressionvectorpcDNA3．1(+)一SAAwassuccessfullyconstructed．Theex— pressionlevelofSAAinCNE-2cellstransfectedbypcDNA3．1(+)一SAAwassignificantlyhigher．Meanwhile，MrI11tes· ringshowedthatCNE一2cellproliferationWas fasterafterbeingtransfectedwiththerecomb