ppc基因敲除对大肠杆菌L-色氨酸发酵的影响.pdfVIP

L 鑫ETFE物RSIN技BIOT术ECHHN通OLOG讯YVo1．．24No．．6Nov．．，，2013 80l doi：10．3969／j．issn．1009—0002．2013．06．Oll 研究报告 ppc基 因敲除对大肠杆菌 一色氨酸发酵的影响 申彤 ，徐庆阳 ，张成林 ，谢希贤 1．天津科技大学 生物工程学院，工业发酵微生物教育部重点实验室， 天津 300457： 2．新疆大学 生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046 [摘要] 目的：减少大肠杆菌L-色氧酸前体物质磷酸烯醇式丙酮酸 向草酰 乙酸的代谢流， 提高其L-色氨酸 的产量 。 方法 ：以大肠杆菌TRTH0709为 出发菌株 ，利用Red重组敲除技术敲除磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Ppc)编码基 因PPc ． 并经测序和酶活性检测确证 ；对 出发菌株和基 因敲除菌株进行L-色氧酸发酵， 对 比分析发酵结果 。结果 ：测序和酶 活性检测结果表 明ppc基 因被成功敲除。发酵结果表 明，与出发菌株相 比，基 因敲除菌株TRTH0709App。生长速度减 慢 ，最终生物量减少32％，L-色氧酸产量 降低27％，但糖酸转化率提高6％；向发酵培养基 中添加 1％琥珀酸后 ， TRTHO709Appc的生长速率和产酸量有所提高，但仍与出发菌株有一定差距 。结论 ：虽然PPc基因敲除对菌体生长和 产酸量影响较大，但能有效提高其糖酸转化率 ；选育Ppc弱化 的突变株 以达到减弱代谢流且不影响菌体生长， 以及增 加，J一色氨酸积累的 目的，将是本研究今后的主要方 向。 【关键词] ，J一色氧酸；磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶；大肠杆菌 [中图分类号] Q78；TQ922 [文献标识码] A [文章编号] 1009—0002(2013)06—0801—04 Effects of Gene ppc Disruption on L-Tryptophan Fermentation by Escherichia coli SHEN Tong ，XUQing—Yang，ZHANGCheng—Lin，XIEXi—Xian 1．CollegeofBiologicalEngineering，TianjinUniversityofScience Technology KeyLaboratoryofIndustrialMi— crobiologyofEducationMinistry，Tianjin300457；2．CollegeofLifeScienceandTechnology，XinjiangUniversity， Urumqi830046；China Corresponding author．E-maih xixianxie@tust．edu．cn [Abstract]0bjective：Toreducethebypassflow ofphosphoenolpyruvateandimprovetheL-tryptophanproduc— tion ofgenetically engineered Escherichia coli．Methods：E．coliTRTH0709 wasused asan originalstrain，and the geneppccoding phosphoenolpyruvate carboxylase(Ppc)wasdisrupted by R