重组葡萄糖脱氢酶的酶学性质及其偶联辅酶再生 enzymatic characterization and coenzyme regeneration of a recombinant glucose 1-dehydrogenase.pdfVIP

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2017-11-16 发布于上海
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重组葡萄糖脱氢酶的酶学性质及其偶联辅酶再生 enzymatic characterization and coenzyme regeneration of a recombinant glucose 1-dehydrogenase

重组葡萄糖脱氢酶的酶学性质及其偶联辅酶再生余涛1，胡蝶2，邬敏辰”，汪俊卿2，冯峰1，顾颖3 (1．江南大学药学院，江苏无锡214122；2．江南大学生物工程学院，江苏无锡214122；3．江南大学无锡医学院，江苏无锡214122) 摘要：为解决生物催化氧化还原反应中辅酶循环问题，人_Y-合成密码子优化后的嗜酸热源体 BL21(DE3)中表达，粗酶液经镍 Thermoplasmaacidophilum葡萄糖脱氢酶基因Sygdh，于E．coli kDa。柱亲和层析获得纯化的重组葡萄糖脱氢酶SyGDH。SDS—PAGE显示相对分子质量为41．0 6．0～8．0稳定；最适反应温度为40℃，在酶学性质分析表明：该酶的最适pH值为7．5，在pH 55℃以下稳定；最适条件下其比活性达4．5 U／mg；Zn2+对其有明显激活作用；该酶对NADP+的亲和力大于NAD+且对大多数有机溶剂有良好的耐受性；对D一葡萄糖的K。和旷一值分别为 28．2mmol／L和6．5 U／mg。在葡萄糖脱氢酶与羰基还原酶偶联构建的NADPH辅酶循环体系中，以4一氯乙酰乙酸乙酯为底物，羰基还原酶催化产物4一氯一3一羟基丁酸乙酯的产率为99．0％，是未添加葡萄糖脱氢酶时产物产率的3．11倍，表明重组SyGDH具有为生物催化氧化还原反应提供辅酶NADPH再生的能力。关键词：葡萄糖脱氢酶；酶学性质；羰基还原酶；辅酶循环；生物催化 925文献标志码：A 文章编号：1673—1689(2014)09—0910—07 中图分类号：TQ Characterizationand of Enzymatic CoenzymeRegeneration aRecombinantGlucose 1-Dehydrogenase YU Ta01，HUDie2，形UMinchen“，WANG Junqin92，FENG屁耐，GUyi存 ofPhamlaceutics of (1．School 214122，China；2．School Science，JiangnanUniversity，Wuxi Biotechnology Medical 214122，China；3．Wuxi 214122，China) JiangnanUniversity，Wuxi School，JiangnanUniversity，Wuxi Abstract：A a of codon—optimizedgene(namedSygdh)encodingglucose1一dehydrogenase wasclonedintothe and in Thermoplasmaacidophilum