一个深黄被孢霉苹果酸脱氢酶基因的克隆与表达.pdfVIP

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2017-11-24 发布于天津
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一个深黄被孢霉苹果酸脱氢酶基因的克隆与表达

21 卷 3 期生命科学研究灾燥造援21 晕燥援3 年月圆园17 6 蕴蚤枣藻杂糟蚤藻灶糟藻砸藻泽藻葬则糟澡 Jun. 圆园17 DOI ：10.16605/ki.1007-7847.2017.03.004 个深黄被孢霉苹果酸脱氢酶基因的克隆与表达锦锦季秀玲林连兵魏云林张琦* , , , , (昆明理工大学生命科学与技术学院, 中国云南昆明650500) 摘要根据转录组测序结果设计特异性引物, 以深黄被孢霉( ) M6-22 的cDNA 为模板, : Mortierella isabellina PCR 扩增苹果酸脱氢酶基因MIMDH2, 测序结果显示该序列长 1 017 bp, 编码338 个氨基酸序列分析表明该序列与已报道的烟曲霉(A sp ergillus f umigates)线粒体苹果酸脱氢酶的相似性最高, 达71.26%, 且含有苹果酸脱氢酶的保守辅酶结合位点底物结合位点和催化活性位点将 2 片段连接到表达载体pET32a (+) 中, 构尧 MIMDH 建重组表达质粒pET32a-MIMDH2, 并转化至大肠杆菌BL21 中进行诱导表达, SDS电泳检测结果显示在50 kD 左右处有一蛋白质条带, 酶活分析结果显示经镍柱亲和层析纯化的重组蛋白酶活高达271.33 U/mg 以上结果说明所克隆的MIMDH 2 为一个新的潜在的苹果酸脱氢酶基因, 所编码的蛋白质具有苹果酸脱氢酶的活性关键词深黄被孢霉; 苹果酸脱氢酶(MDH); 基因克隆; 序列分析; 原核表达 : 中图分类号 Q786 文献标识码 A 文章编号 1007 7847(2017)03 0208 05 : : : - - - Cloning and Expression of a Novel Malate Dehydrogenase Gene from Mortierella isabellina CUI Jin-jin, JI Xiu-ling, LIN Lian-bing, WEI Yun-lin, ZHANG Qi* (Faculty of L if e Science and Technology, K unming Univers ity of Science and Technology, K unming 650500, Yunnan, China) Abstract: A pair of gene-specific primers was designed based on the RNA-seq data, and a full-length c