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一个深黄被孢霉苹果酸脱氢酶基因的克隆与表达
21 卷 3 期 生命科学研究 灾燥造援21 晕燥援3
年 月
圆园17 6 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻 砸藻泽藻葬则糟澡 Jun. 圆园17
DOI :10.16605/ki.1007-7847.2017.03.004
个深黄被孢霉苹果酸脱氢酶基因的克隆与表达
锦锦 季秀玲 林连兵 魏云林 张 琦*
, , , ,
(昆明理工大学生命科学与技术学院, 中国云南 昆明650500)
摘 要 根据转录组测序结果设计特异性引物, 以深黄被孢霉( ) M6-22 的cDNA 为模板,
: Mortierella isabellina
PCR 扩增苹果酸脱氢酶基因MIMDH2, 测序结果显示该序列长 1 017 bp, 编码338 个氨基酸 序列分析表明该
序列与已报道的烟曲霉(A sp ergillus f umigates)线粒体苹果酸脱氢酶的相似性最高, 达71.26%, 且含有苹果酸脱
氢酶的保守辅酶结合位点 底物结合位点和催化活性位点 将 2 片段连接到表达载体pET32a (+) 中, 构
尧 MIMDH
建重组表达质粒pET32a-MIMDH2, 并转化至大肠杆菌BL21 中进行诱导表达, SDS电泳检测结果显示
在50 kD 左右处有一蛋白质条带, 酶活分析结果显示经镍柱亲和层析纯化的重组蛋白酶活高达271.33 U/mg
以上结果说明所克隆的MIMDH 2 为一个新的潜在的苹果酸脱氢酶基因, 所编码的蛋白质具有苹果酸脱氢酶的
活性
关键词 深黄被孢霉; 苹果酸脱氢酶(MDH); 基因克隆; 序列分析; 原核表达
:
中图分类号 Q786 文献标识码 A 文章编号 1007 7847(2017)03 0208 05
: : : - - -
Cloning and Expression of a Novel Malate Dehydrogenase Gene
from Mortierella isabellina
CUI Jin-jin, JI Xiu-ling, LIN Lian-bing, WEI Yun-lin, ZHANG Qi*
(Faculty of L if e Science and Technology, K unming Univers ity of Science and Technology, K unming 650500, Yunnan, China)
Abstract: A pair of gene-specific primers was designed based on the RNA-seq data, and a full-length c
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