维生素D受体在体外培养SD大鼠脂肪细胞中的表达.pdfVIP

动物医学进展 。2017，38(2)：40—45 ProgressinVeterinaryM edicine 维生素 D受体在体外培养 SD大鼠脂肪细胞 中的表达 程 佳 ，杨袜琦，庞 田田 (陕西理工大学维生素D生理与应用研究所，陕西汉中723000) 摘 要 ：为 了探索维生素D受体 (VDR)在 SD大鼠脂肪细胞分化过程 中的表达规律 ，采用 Ⅱ型胶原酶消 化法进行 sD大鼠脂肪细胞的分离培养，并将其诱导分化为成熟的脂肪细胞，分别在细胞生长至单层汇合后 的第 0、4、8、12、16天收集细胞样品。对 VDR和脂滴进行荧光染色，同时采用 Westernblot对脂肪细胞分 化过程 中的VDR蛋白表达量进行分析，采用 real—timePCR定量分析脂肪细胞分化过程 中的VDR表达量。 结果显示 ，随SD大鼠脂肪细胞的分化 ，细胞 中脂滴逐渐增加，VDRmRNA和蛋 白的表达量与脂质积累过程 呈负相关性，表明VDR的表达在脂肪细胞分化过程 中有一定的变化规律，其可能以负反馈的调节机制参与 了脂 肪细胞 的分化过 程 。 关键词 ：维生素 D受体；脂肪细胞；脂滴 ；SD大鼠 中图分类号 ：$852．163 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2017)02—0040—06 维生素 D受体 (vitaminDreceptor，VDR)属于 的作用 ，以VDR在 SD大鼠脂肪细胞分化过程 中的 核受体(类 固醇激素 ／甲状腺激素受体)超家族成员， 表达规律为研究 内容 ，采用细胞生物学和生物化学 在体 内主要介导维生素 D的细胞生物学作用[1]。当 等方法对 VDR的表达进行分析，以期为 VDR及其 VDR与其活性配体 1，25(OH)。D。结合后 ，在细胞 配体 1，25(OH)D。预防和治疗肥胖提供理论依据 。 核内与视黄酸 x受体 (retinoidXreceptor，RXR)形 l 材料与方法 成异二聚体 ]，并结合于靶基因启动子区的维生素 1．1 材料 D反应元件 (vitaminDresponseelements，VDREs) SD大 鼠的乳鼠 10只 (西安交通大学实验动物 上 ，以直接或间接的作用方式激活下游靶基 因的表 中心)；200目细胞筛网 (浙江)；I1型胶原酶 (Sig— 达 ，从而介导细胞增殖 、分化和凋亡，调节机体免疫 ma)，F12培养基 (武汉)，胎牛血清 FBS(Gibco)，青 和血管生成等各种生物学过程 [3-7]。越来越多的研 霉素 、链霉素 (Hyclone)，SDS—PAGE凝胶试剂盒 究证明，VDR及其配体 1，25(OH)2D3不仅参与钙 (碧云天)，PVDF膜、脱脂奶粉 (北京鼎 国)，胰 岛素 磷代谢 的经典调节过程 ，还参与了由肥胖 引起 的代 (Geneviwe)，Mastermix(ABI)，Bodipy(Sigma)， 谢相关综合征等疾病 的发生[8。 。临床研究显示， VDR D-6mousemonocloneantibody(SantaCruz)， 在肥胖患者体 内，25(OH)D水平较正常个体低 ，而 Alexflour488conjugateGoatanti—mouseIgG(H+ 当肥胖患者补充维生素D药物增加血清 25(OH)D L)(Invitrogen)；其他未标明试剂均为分析纯 。 水平后，能有效减少 内脏脂肪的沉积[1。此外，体 l_2 方法 内1，25(OH)。D3水平与肥胖患者的BMI和体脂量 1．2．1 SD大鼠脂肪细胞分离与培养 根据 已建立 呈负相关[1。诸多研究表 明，VDR及其配体 1，25 的方法 [1，断颈处死 SD大 鼠，于 750mI／L乙醇中 (OH)。D。与脂肪组织功能之间存在一定 的相关 浸泡 15min，取腹股沟脂肪组织 ，在 PBS中漂洗数 性[1引，但维生素 D系统对脂肪细胞 的影响 尚有争 次 ，剪碎至 1mm。大小，置于 15mL离心管中，加入 论 ，有待进一步验证 。我们的前期研究检测 了VDR 5倍脂肪组织体积的2g／LII型胶原酶 ，置于 37℃恒 在大 鼠不 同脂肪组织