同步荧光法测定大鼠血浆中牛血清白蛋白的研究.pdfVIP

第28卷 第 5期 影 像 科 学 与 光 化 学 Vo1．28 No．5 2010年 9月 1agingScienceandPhotochemist Sept．，2010 同步荧光法测定大 鼠血浆中 牛血清 白蛋 白的研究 覃光炯 。，高云华 (1．中国科学院 理化技术研究所 光化学转换与功能材料重点实验室，北京 100190； 2．中国科学院研究生院，北京 100049) 摘 要：以异硫氰酸荧光素标记的牛血清 白蛋 白为模型药物，采用 同步荧光法 测定 了大鼠尾静脉注射模型药物后血浆 中药物浓度 随时间的变化．系统研究了 样品处理、测试条件等一系列因素对测试结果的影响，建立 了一种简单有效的 测定生物体 内的微量外源性蛋 白质的方法，并与酶联免疫吸附法测定结果进行 了比较 ，二者的测试结果具有 良好的一致性． 关 键 词：同步荧光法；牛血清白蛋白；血药浓度；酶联免疫吸附法 文章编号：1674—0475(2010)05—0354—08 中图分类号：0657 文献标识码：A 许多蛋 白质和多肽类物质在临床上具有药效_1]，可用来治疗某些特定的疾病．随着 生物学技术的飞速发展，越来越多的蛋 白质和多肽类药物 已被广泛的研究，有的已进入 临床实验阶段Ⅲ2]．测定这类药物在给药后 的药代动力学参数 ，特别是血药浓度一时间曲 线，对于判定药物的疗效、确定最优给药剂量、指导临床用药具有重要意义． 蛋白和多肽类药物的药代动力学具有生物半衰期短、血药浓度低等特性，同时生物 体 内有大量相似的干扰物质存在，使蛋 白和多肽类药物的药代动力学测定更加困难．目 前常用的分析方法主要为免疫分析法[4]、同位素标记示踪法[5]、生物检定法[6]以及一些 理化分析技术如高效液相色谱、质谱、色质联用[7]等．但这些方法都有一些缺陷，如免疫 分析法需要开发相应的抗体，测定时间较长，测定结果在很大程度上受到药物与对应抗 体的反应性的影响；同位素标记法测定需要特定的防护措施；高效液相色谱、质谱测定， 样品前处理步骤复杂，且测试所用仪器均较昂贵． 在药物的前期研究中，大多采用动物实验的方法评价药物的药代动力学Es，．本论文 收稿 日期：2010—05—11：修 回日期：2010—05—25．通讯联系人：高云华，E-mail：yhgao@mail．ipc．ac．ell 作者简介 ：覃光炯 (1983一)，博士研究生，主要从事药学分析研究，E-mail：gjqin@yahoo．con3．cn． 354 第 5期 覃光炯等 ：同步荧光法测定大鼠血浆中牛血清 白蛋白的研究 355 拟建立一种快速、灵敏的测定实验动物体 内蛋 白和多肽类药物血药浓度的分析方法．采 用异硫氰酸标记的牛血清 白蛋 白(FITC-BSA)为模型药物，通过对样 品处理、测试方法等 一 系列条件的摸索，建立了一种采用同步荧光法测定FITC-BSA的大鼠体 内药代动力学 的分析方法，并用酶联免疫吸附法(ELISA)验证了该方法的准确性． 1 实验部分 1．1 仪器与试剂 仪器：F-2500荧光分光光度计 (日本 Hitachi公司)；RT-2100C酶标仪 (深圳市蕾杜 电子有限公司)；EASYPureLF超纯水仪 (美 国Barnsted公司)；TGL_16B高速离心机 (上海安亭科学仪器厂)． 试剂：异硫氰酸荧光素标记牛血清白蛋 白(FITC-BSA，标记比MF丌c：MBsA一 1．75， pfjSA一 15．12mg／mL，北京成文免疫化学研究室)；牛血清 白蛋 白酶联免疫试剂盒 (无锡 罗益生物技术有限公司)；牛血清 白蛋 白标准品 (中国药品生物制品检定所)；氯化钠、氯 化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠均为分析纯试剂，所有实验所用水均为超纯水． 1．2 大鼠血液的采集以及血清血浆的制备 雄性 SD大鼠(250g)乙醚麻醉之后，采用 5．0mL注射器心脏取血．血清制备：血液 取出后装入 2．0m