生物化学 蛋白质分离纯化与鉴定.pptVIP

蛋白质分离纯化与鉴定;一、蛋白质的分离、纯化鉴定的一般原则;蛋白质分离纯化的一般原则： 1.前处理：因动/植物/细菌而异 目的蛋白在细胞内 动物：匀浆器、组织捣碎机、超声波和丙酮干粉等。 植物：石英砂研磨或纤维素酶处理等。 微生物：超声振荡、研磨、溶菌酶和细胞自溶等。 目的蛋白在细胞组分中，可用差速离心等方法。;2.粗分级分离：采用盐析/等电点沉淀/有机溶剂分级分离等方法 3.细分级分离：采用凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等 4.结晶 ;二、混合蛋白质的分离、纯化方法;2、以分子大小为依据的方法 （1）凝胶层析 （2）透析 （3）超滤 （4）离心 ;凝胶层析;凝胶层析;;;;;透析——只用于除盐类和小分子杂质;透析——只用于除盐类和小分子杂质;超过滤——除小分子杂质，分离、浓缩蛋白质;密度梯度离心;3、以蛋白质电荷为依据的??法 （1）电泳 （2）离子交换层析 ;电泳法;垂直板电泳;垂直板电泳;垂直板电泳;SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳;SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳;SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳;;SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳;等电聚焦（ Isoelectric focusing）;等电聚焦（ Isoelectric focusing）;等电聚焦（ Isoelectric focusing）;;等电聚焦（ Isoelectric focusing）;离子交换层析;离子交换层析;;离子交换层析;离子交换层析;离子交换层析;离子交换层析;三、蛋白质含量测定及纯度鉴定;蛋白质的纯度鉴定;END