注射用双黄连工艺中除热原效果探究.doc

注射用双黄连工艺中除热原效果探究 　　【摘 要】 目的：建立中药注射剂工艺中去除热原效果的评价方法。方法：以动态浊度法，测定中药注射剂浓配药液中活性炭和美国Millipore公司生产的切向流超滤系统使用前后细菌内毒素的含量，评价其去除热原的效果。结果：在注射用双黄连浓配药液的活性炭和美国Millipore公司生产的切向流超滤系统的配剂药液使用效果的评价中，其中使用活性炭的注射用双黄连浓配药液中的细菌内毒素吸附率大于70%，使用美国Millipore公司生产的切向流超滤系统去除注射用双黄连浓配药液中细菌内毒素均能达到Log值大于3。结论：明确中药粉针剂在制造过程中加入活性炭吸附大量热原是科学合理的，但以上结果也表明，对于大剂量的细菌内毒素，活性炭不能完全吸附去除，而使用美国Millipore公司生产的切向流超滤系统去除热原效果更优。 【关键词】 热原 活性炭 超滤 中药注射剂 注射用双黄连 热原（Pyrogen）又称内毒素，注入人体可引起不良反应，可使人体产生发冷、寒颤、发热、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40℃以上，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救可危及生命。因此国家食品药品监督管理局在《中药注射剂安全性再评价生产工艺评价技术原则（试行）》指出“生产工艺过程中应明确除热原（或细菌内毒素）的方法及条件，如活性炭的用量、处理方法、加入时机、加热温度及时间等，并考察除热原效果及对药物成份的影响。应提供相关研究资料。”因此建立一种注射用双黄连生产工艺过程中的热原去除效果评价方法，该方法的建立对中药注射剂生产和开发提供一种科学有效的评价方法。 1 仪器与试药 BET-72细菌内毒素测定仪（天津天大天发科技有限公司） ZH-2BLENDER漩涡混合器（天津药典标准仪器厂） 蠕动泵CL-25型（北京旭邦膜设备责任有限公司） 超滤柱10k、1ft2、Regenerated Cellulose（Millipore Corporation.Billerica MA01821） 针用活性炭（180℃活化4h），批号：090901（浙江杭木工业有限公司活性炭分公司） 定量检测鲎试剂，规格：0.03Eu批号：1002260（湛江博康海洋生物有限公司） 细菌内毒素检查用水，内毒素含量50000Eu/ml 一次性注射器，规格：1mL批号：080927（上海康寿医疗器械有限公司制造） 注射器过滤器（无菌无热原滤器），LotNo.：081117-051（JETBIOFIL提供） 双黄连粉针剂浓配药液批号：100501、100502、100503（哈药集团中药二厂粉针制剂车间提供） 2 方法与结果 2.1 水中热原去除效果试验 取注射用水45ml，加5ml自制热原，取1ml作为对照，其余加0.25g活性炭，加热至微沸，保持15min，过滤，取1ml滤过液作为活性炭吸附供试品溶液。 取去离子水1000ml，加50ml自制热原，取1ml作为对照，其余超滤，取1ml滤过液作为超滤供试品溶液。 对照溶液梯度稀释（10倍、下同），取1/1000和1/10000两个浓度，分别取0.1ml，加0.1ml鲎试剂，仪器测定。 活性炭吸附供试品溶液和超滤供试品溶液各取原液和1/10两个浓度，分别取0.1ml，加0.1ml鲎试剂，仪器测定。重复试验三次。 2.2 注射用双黄连浓配药液除热原效果试验[1] 取注射用双黄连浓配药液40ml，加10ml自制热原，取1ml作为对照样品，其余加0.25g活性炭，加热至微沸，保持15min，过滤，取1ml滤过液作为活性炭吸附供试品溶液。 取注射用双黄连浓配药液500ml，加100ml自制热原，取1ml作为对照，其余超滤，取1ml滤过液作为超滤供试品溶液。 对照样品溶液梯度稀释（10倍，下同），取1/100、1/1000和1/10000三个浓度，分别取0.1ml，加0.1ml鲎试剂，仪器测定。 活性炭吸附供试品溶液和超滤供试品溶液分别梯度稀释，取 1/100、1/1000和1/10000三个浓度，分别取0.1ml，加0.1ml鲎试剂，仪器测定。重复试验三批。 2.3 内毒素测定方法 内毒素含量测定采用鲎试剂动态比浊法进行含量测定，采用光密度反应时间法测定含量。 （1）细菌内毒素标准曲线的制备：取细菌内毒素工作标准品1支，用细菌内毒检查用水将内毒素进行2倍稀释，使其最终浓度分别为2.0、1.0、0.5、0.250、0.125EU/ml的稀释系列，各取0.1ml分别加到预先加有0.1mlTAL的反应管内，混合均匀，插入BET-72细菌内毒素测定系统内进行检测，每个浓度重复3管。标准曲