线粒体D-Loop区全序列分析A2a基因敲除小鼠生产扩大群的遗传稳定性.pdf

第 27卷 第 4期 实验 动物科学 V01．27 NO．4 2010年 8月 LAB0RAT0RY ANIMAL SCIENCE August2010 护 勺 研究 ·论著 、 护 、护 、驴 、：2 、g 线粒体 D—Loop区全序列分析 A2a基 因敲除小鼠生产 扩大群 的遗传稳定性 王金丹 管敏强 李 渊 陈锡文 金龙金 (1温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室)(2．温卅l医学院实验室实验动物 中心 ，温州 325035) 摘要 ：目的 采用线粒体 D—Loop全序列测定法对 A2a基 因敲除小 鼠近交系生产扩大群 中的小 鼠进行 了遗传稳定 性分析 。方法 对 5个子代 A2a杂合子 50只小 鼠的线粒体 DNAD—Loop区进行 了PCR扩增 ，产物纯化后测序 ，其 结果与小 鼠线粒体标准序列 比对 ，分析 50只小 鼠之间的序列差异 。结果 发现检测 的 50只小 鼠的 D—Loop基 因 序列完全一致 ，且与小 鼠线粒体标准序列完全一致 。结论 A2a基 因敲除小 鼠扩大繁殖群具有较好 的遗传稳定 性 ，同时为进一步研究 A2a小 鼠提供遗传学资料 。 关键词 ：A2a小 鼠；线粒体 DNAD．1oop区；序列分析 中图分类号 ：Q95—33 文献标识码 ：A 文章编号 ：1006—6179(2010)04-0021—03 实验动物遗传质量监测的 目的是为 了保证动物 1 材料和方法 品种、品系的遗传质量与标准一致 ，并使之在长期 的 繁殖生产中遗传质量保持稳定不变 ，从而确保动物 1．1 实验动物 实验结果 的准确性 、重复性和可 比性 。 目前 ，许 2005年 l0月从美国波士顿大学 引进腺苷 A2a 多方法在不 同程度上都存在着精确度不高 、检测位 受体基因敲除小 鼠6只 ，其 中雄 鼠3只，雌鼠3只。 点及反映遗传概貌 等局 限性 。 自从 1979年 Crews 按近交系小 鼠保种繁育方法在温州医学院实验动物 等人首次测定了人线粒体基 因组的全序列后 ，现 已 中心 {SYXK(浙)2005—0061}SPF级动物房 中 WC 有多种动物的线粒体基 因组全序列被测定 ，如大 鼠、 饲养繁殖。经过 l5代繁殖后 ，现从 11—15代 中每 小 鼠、水牛 、绵羊 、山羊 、猪 、马、驴 、鸡 、北京鸭等。线 代取杂合子 10只共 50只。 粒体 DNA(mtDNA)相对分子质量小 ，拷贝数高 ，呈 1．2 主要试剂 母系遗传 ，由于线粒体没有组蛋 白的保护和无 DNA PCR引物，根据小 鼠标准序列及 D—Loop基 因位 修复系统 ，因此它的突变率 比核 DNA高得多 ，其 多 置，按照引物设计软件设计，引物序列见表 l。引物由 态性丰富等优点广泛应用于各领域 “。我们对美 上海生工生物工程技术服务有限公司合成。PCR聚合 国引进 的近交系 A2a基因敲除小 鼠扩大生产群 中5 酶试剂、DNA片段纯化试剂盒为宝生物工程 (大连)有 个子代杂合子小 鼠线粒体 D—Loop基 因全序列进行 限公司产品。琼脂糖、Tris试剂为Promega公司进 口分 测定 ，并作 了遗传学分析，为 A2a基 因敲除小 鼠的 装；蛋 白酶 K为 Merk公司的产 品；Tris一饱和酚 (pH 遗传特征研究提供理论基础 。 8．0)为上海生工生物工程技术服务有限公司产品。 表 1 引物名称及序列 收稿 日期：2009—12—22 基金项 目：浙江省科技厅项 目2008F80007 作者简介 ：王金丹 (1976一)，女 ，广西