南方型紫花苜蓿耐盐突变体叶片盐胁迫应答差异基因-应用科学学报.pdfVIP

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2017, 25(10): 1588~1599 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2017.10.004 南方型紫花苜蓿耐盐突变体叶片盐胁迫应答差异基因鉴定与分析 张婧蕾 李佳赟 王依纯 裴翠明 马进* 浙江农林大学风景园林与建筑学院，临安311300 * 通讯作者，majinzjl@ 163.com 摘 要 紫花苜蓿(Medicagosativa)是世界上被广泛种植的一种优质牧草。盐胁迫对紫花苜蓿的生长和 产量具有明显抑制作用。为了理解南方型紫花苜蓿(M.sativaMillennium)受盐胁迫的内在分子机制，挖 掘其与耐盐密切相关的功能基因。以250 mmol/L NaCl 处理72 h 的南方型紫花苜蓿耐盐突变体叶片进 行Illumina HiSeqTM 2000 高通量转录组测序，并对所获得的差异表达基因进行基因本体(Gene Ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG) pathway 生物信息 学分析，获得可能耐盐潜在靶标基因。同时，挑选8 个差异表达基因验证测序结果的可靠性。结果表明， 过滤后对照(control, CK)和盐处理(salt stress, ST)样本分别保留了60 395 324 和60 303 692 对reads ，其 中54.18% 和53.77% 的reads 能精确比对到参考序列蒺藜苜蓿(M.truncatula) 上。差异表达基因 (differentially expressed genes, DEGs) 结果显示，在样品中共检测到30 900 个基因表达发生改变，其中 4 187上调表达，3 507 下调表达。GO 功能分析显示，差异表达基因主要表现在结合、催化活性、细胞组分 和细胞等。KEGG Pathway 分析显示，差异表达基因广泛涉及次生代谢、代谢途径及苯丙素的生物合成。 另外，筛选了与紫花苜蓿盐胁迫应答相关的基因谷胱甘肽硫转移酶、超氧化物歧化酶Cu/Zn 蛋白、L-抗坏 血酸过氧化物酶、类受体蛋白激酶、诱导类受体蛋白激酶、蔗糖非发酵型蛋白激酶、类钙调素蛋白、胆碱单 加氧酶、1- 吡咯啉-5-羧酸合成酶、蛋白磷酸酶2C、海藻糖磷酸酯酶等和AP2 类乙烯响应的转录因子、 bHLH36 转录因子、NAI 1转录因子、bZIP 转录因子、C3H 锌指蛋白、核酸结合转录因子活性、Myb 转录因 子、NAC 转录因子蛋白、序列特异性DNA 结合转录因子蛋白和WRKY 转录因子等。本研究为揭示紫花 苜蓿耐盐分子机制提供了基础资料。 关键词 南方型紫花苜蓿，叶片，盐胁迫，转录组 中图分类号 S722.3 文献标识码 A Identification and Analysis of Differentially-expressed Genes Under Salt Stress in Leaves of Southern Type Alfalfa (Medicagosativa Millennium) Salt Tolerant Mutant ZHANG Jing-Lei LI Jia-Yun WANG Yi-Chun PEI Cui-Ming MA Jin* School of Landscape Architecture, Zhejiang Agriculture and Forestry University, Linan 311300, China * Corresponding author, majinzjl@163.com Abstract Alfalfa (Medicagosativa) is widely grown and is one of the most important forage crops in the world, but its growth and biomass production are markedly reduced u