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高温胁迫下紫花苜蓿抑制消减文库的构建.PDF
草 业 学 报 第 卷 第 期
１２６－１３２ ２０ ５
年 月 ，
２０１１ １０ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ Ｖｏｌ．２０Ｎｏ．５
高温胁迫下紫花苜蓿抑制消减文库的构建
１ ２ ２ ２ ３ １ １
韩明鹏 ，王彦华 ，高永革 ，张晓霞 ，苏芳蕊 ，许红 ，王成章
（ 河南农业大学牧医工程学院，河南 郑州 ； 河南省饲草饲料站，河南 郑州 ；
１． ４５０００２２． ４５０００８
３．河南农业大学信息与管理科学学院，河南 郑州 ４５０００２）
摘要：为分离和获得紫花苜蓿高温胁迫诱导相关基因片段的 序列。以秋眠 级的紫花苜蓿品种（ ）为
ＥＳＴ ６ ＡＢＩ７００
材料，以 高温胁迫下的紫花苜蓿幼嫩茎叶 为试验方（ ），以正常生长（ ）的紫花苜蓿幼嫩茎叶
４５℃ ｃＤＮＡ ｔｅｓｔｅｒ ２２℃
为驱动方（ ），利用抑制性消减杂交技术（ ， ）构建了高温胁迫
ｃＤＮＡ ｄｒｉｖｅｒ ｓｕ ｒｅｓｓｉｏｎｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ＳＳＨ
ｐｐ ｙ
下紫花苜蓿幼嫩茎叶的正向抑制消减文库。从消减文库中随机挑取 １２０个阳性克隆，进行菌液ＰＣＲ鉴定。结果显
示，消减文库的滴度为 ／ ，重组率为 ，插入片段大小主要集中在 。本研究为紫花苜
４２３０ ｆｕｍＬ ９７．８％ ３００ ７５０ｂ
ｐ ～ ｐ
蓿抗热基因克隆和系统研究高温胁迫下紫花苜蓿基因的表达奠定了一定的理论基础。
关键词：紫花苜蓿；抑制消减杂交；高温胁迫
中图分类号： ； ＋ 文献标识码： 文章编号： （ ）
Ｑ９４３．１Ｓ５４１．１０３ Ａ １００４５７５９２０１１０５０１２６０７
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