酶标抗体抗原.PPTVIP

第一节 酶免疫技术的特点 三大经典标记技术 主要试剂: 酶标记的抗体或抗原 酶标物特点： 免疫学活性 酶对底物的催化活性 酶和酶作用底物 酶和酶作用底物 酶和酶作用底物 酶和酶作用底物 酶和酶作用底物 酶和酶作用底物 酶和酶作用底物 酶标记抗体或抗原 酶标记抗体或抗原 酶标记抗体或抗原 酶标记抗体或抗原 酶标记抗体或抗原 固相载体 固相载体 免疫吸附剂 第二节　酶免疫技术分类 均相酶免疫测定 homogenous enzyme immunoassay 均相酶免疫测定 EMIT示意图 CEDIA示意图 非均相酶免疫测定  heterogeneous enzyme immunoassay 分类：液相酶免疫测定 固相酶免疫测定 以聚苯乙烯等材料作为固相载体的酶联免疫吸附试验（ELISA） 是目前最为常用的固相酶免疫测定 第三节　酶联免疫吸附试验 　 ELISA enzyme-linked immunosorbent assay ELISA方法类型及反应原理 ELISA检测抗原的方法 竞争法 方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。 应用：用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等） ELISA检测抗体的方法 ELISA检测抗体的方法 竞争法 原理：类似检测抗原的竞争法 应用：乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的检测 捕获法 双抗体夹心法测抗原 + - E E E E E E E E E ELISA检测抗原的方法 竞争法测抗原 + - E E E E E E E 2、加待检物 抗原与酶标抗 原竞争与抗体 结合 3、加酶作用 的底物不显色 或显色弱 3、加酶作用 的底物显色 1、已知抗体包 被于载体表面 1、已知抗体包 被于载体表面 2、加待测物 和酶标抗原， 酶标抗原与抗 体结合 E 间接法 方法 用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人IgG（抗抗体或二抗）加底物显色。 优点 一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体 应用 常用于HCV抗体、HIV抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定 间接法测抗体 - E E E E E E E E E + - 双抗原夹心法 原理：类似双抗体夹心法 操作步骤：类似 应用：乙型肝炎表面抗体 ELISA检测抗体的方法 ELISA检测抗体的方法 捕获法 应用： 病原体急性感染诊断中的IgM型抗体 甲型肝炎HAV-IgM抗体 乙型肝炎病毒核心HBc-IgM抗体 原理： 抗人IgMμ链抗体包被 捕获待测标本中IgM类抗体 加入特异性抗原和酶标记特异性抗原的抗体 底物显色 捕获法原理 + - E E E E E 1、固相化抗人 　IgM 1、固相化抗人 　IgM 2、加待测物 特异性IgM与 非特异性IgM 和抗人IgM结合 3、加特异性 抗原，与特异 性抗体结合 4、加酶标抗体 与特异性抗原结 合，加底物显色 2、加待测物 只有非特异性IgM 和抗人IgM结合 3、加特异性抗 原，不能与非 特异性IgM结合 4、加酶标抗体 无抗原结合， 加底物不显色 * 第九章 酶免疫技术 放射免疫技术 荧光免疫技术 酶免疫技术 三大经典标记技术 抗原抗体反应的特异性 + 酶高效催化反应的专一性 原理及特点 特点： 灵敏度高、特异性强、准确性好 酶标记试剂能够较长时间保持稳定 操作简便、对环境没有污染。 易与其它技术偶联 衍生出适用范围更广的新方法。 原理： 酶标抗体（抗原）与抗原（抗体）的特异性反应 酶对底物的显色反应 对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析 原理及特点 标记酶的要求： 活性高 性质稳定 专一性强 酶催化底物的显色信号易于判断和测量 方法敏感，重复性好，简单易行 酶的底物易于配制保存，酶及底物价廉 辣根过氧化物酶（HRP） 糖蛋白（主酶） 亚铁血红素（辅基） 主酶与酶活性无关 辅基是酶的活性中心 RZ值：403nm （辅基）　　　与275nm（主酶） 　　　OD值之比 RZ值与酶活性无关，酶活性单位比RZ值更为重要 ELISA中应用最为广泛的标记用酶 常用酶 碱性磷酸酶（AP） 菌源性AP 肠粘膜AP β–半