携带Bcl-xl基因的重组慢病毒的制备和鉴定.pdfVIP

分 诊断与治疗杂志 2010年3月第2卷第2期 JMolDiagnTher，March2010，Vo1．2No．2 ·87 · · 论 著 · 携带Bcl—xl基因的重组慢病毒的制备和鉴定 李工博 卢光磅 摘【 要】 目的 制备携带Bcl—xl基因的重组慢病毒，并鉴定其感染细胞有效性。 方法 从本所以 前构建的重组质粒pAAV-Bcl—xl获得Bcl—xl基因的编码序列 ，将其置换掉慢病毒质粒pSinEF2一SOX2一Pur中 的SOX2基因编码序列 ，从而得到重组慢病毒质粒pSin—EF2一Bcl—xl—Pur。然后利用这一质粒包装制备了携带 Bcl—xl基因的重组慢病毒颗粒 ，用其感染细胞后用Westernblot和流式检测仪分析了感染前后细胞中Bc1．xl 基因的表达情况。 结果 感染后细胞中Bc1．xl蛋 白的表达水平显著高于感染前。 结论 携带Bcl—xl基 冈的重组慢病毒颗粒包装成功 ，能高效感染细胞 ，为后续的遗传改造树突细胞打下了基础。 [关键词】Bcl—xl基冈；重组慢病毒；树突细胞 Constructionand identificationofarecombinantlentiviruscontainingBcl—xl LIGongbo，LU Guangxiu (InstituteofReproductionandStem CellEngineering，CentralSouthUniversity；NationalEngineeringand ResearchCenterofHumanStemCell，Hunan，Changsha410078，China) A【BSTRACT] Objective ToconstructarecombinantlentiviruscontainingBcl—xlgene，andtodetect itsinfectioncapabiliyt． Methods Bc1xl—encodedsequencewasobtainedfrom ourpreviouslyconstructed plasmidpAAV-Bcl—xl，andusedtosubstitutetheS0X2sequenceinalentiviralplasmidpSin—EF2一S0X2一Purto constructa1entiviralplasm idpSin—EF2一Bcl—xl—Pur．Therecombinant1entiviruscontainingBcl—X1wasassembled． andusedto infect293FTcells．W esternblotandFACSanalysiswereusedtodetectBcl—Xlexpression ininfe；cted cells． Results TheresultsindicatethattheBcl—Xlexpressionlevelintheinfectedcellsaresignificantlyhigher thanthatinthecontrolcells． Conclusion TherecombinantlentiviruscontainingBc1．x1wasSUCCESSfully constructed．which1aidafoundationforusingBcl—X1togeneticallymodi～ dendriticcells． [KEYWORDS】Bcl—xlgene；Recombinantlentivirus；Dendriticcells Bcl—xl是一种 已知 的抗凋亡基 因，属于Bcl2家 抗肿瘤效应 。该研究使用了重组腺病毒作为Bcl—xl 族 。Bcl—xl在线粒体膜上表达 ，其抗凋亡的机制是拈 的载体 ，而腺病毒通常导致转基因的短暂表达。为 抗bax和bak诱发的caspase介导的凋亡 。研究表明 实现Bc1．xl在树突细胞 中的长期表达 ，我~rJN备了携 Bcl。xl能抑制多种细胞的凋亡_2。]，并对造血和免疫细 带 Bc1．xl的重组慢 病毒载体 ，并在 293FT细胞 和 胞的存活发挥重要的调节作用 。