第九章： 酶免疫技术.pptVIP

　 ELISA的试剂组成 1、已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）； 2、酶标记的抗原或抗体（结合物）； 3、酶的底物(显色剂A、显色剂B)； 4、结合物及标本的稀释液； 5、洗涤液； 6、终止液； 7、对照设置：阴性对照品和阳性对照品 1、免疫吸附剂：　已包被抗原或抗体的固相载体 包被抗体 封闭 固相载体： 　1）要求：吸附性能好、不参与化学反应，不影响抗原或抗体免疫学活性、空白值低且透明度高。 　2）常用载体： 　聚苯乙烯：较强的吸附蛋白质的性能，不损伤抗原或抗体的免疫学活性。 　聚氯乙烯：对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。 3）常规检查： 　以一定浓度的人IgG（一般为10ug/L）包被ELISA各孔后，每孔加入适当稀释的酶标抗人IgG抗体，按ELISA的操作步骤进行保温、洗涤、显色、终止反应，测定每孔的吸光度，计算平均值和CV%，CV%应小于10%。 用碱性缓冲液稀释的蛋白质溶液 4℃过夜 或37℃2-6h 0.05M pH9.6 碳酸盐缓冲液 浓度为10ng/ml-20ug/ml 包被(coating)：将抗原或抗体固定化的过程。 5%-20%小牛血清 0.05%-0.5%的BSA 1%明胶 脱脂奶粉（5%） 继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。让大量不相关的蛋白质充填那些空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。