角蛋白19片段单克隆抗体的制备及鉴定.pdfVIP

动物医学进展， ， （ ）： ２０１４ ３５ １２ ５９ － Ｐｒｏ ｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇ 　 　 ｙ 　 角蛋白 片段单克隆抗体的制备及鉴定 １９ １ ２ １ １ １ ， ， ， ， 张慧茹 翟晋豫 刘 珍 王雪琴 孟素香 　 （ ， ； ， ） 河南工业大学生物工程学院 河南郑州 河南省生物工程技术研究中心 河南郑州 １． ４５０００１ ２． ４５０００１ ： （ ） （ ）， 摘 要 为制备角蛋白 片段 的单克隆抗体 采用间接 方法检测免疫小 １９ ＣＹＦＲＡ２１１ ｍＡｂ ＥＬＩＳＡ 　　 　 － ， 、 、 ， ， 鼠的抗体效价 融合 筛选 克隆化单克隆抗体 将筛选得到的单克隆细胞株注入小鼠腹腔制备腹水 采用辛 、 ， 、 ； 酸硫酸铵法 蛋白 柱纯化腹水抗体 以 凝胶电泳 紫外分光光度法检测抗体纯度和浓度 利用 Ａ ＳＤＳＰＡＧＥ － ； （ ）。 鼠抗体亚型鉴定试剂盒对单克隆抗体进行亚型鉴定 采用阻断 ＥＬＩＳＡ 法测定ｍＡｂ 的敏感性 ＩＣ 结果 ５０ ， ， 、 、 、 ， 表明 筛选获得 株分泌角蛋白 片段 的细胞株 将 株细胞株 注入小鼠腹腔 ４ １９ ｍＡｂ ４ ２Ｆ９ ３Ｈ５ ７Ｃ３ ６Ｆ１１ ５ ５ ５ ５ 、 、 、 ， ， 分别获得效价为 ２．５６×１０ ５．１２×１０ ５．１２×１０ ２．５６×１０ 的单克隆抗体 经纯化 抗体蛋白浓度为 ／ ／ ， ， ／ ／ 。 １２．４３ｍ ｍＬ １６．００ｍ ｍＬ 为ＩＧ１型抗体 其ＩＣ 在 １．０３ｎ ｍＬ １．５３ｎ ｍＬ 之间 说明获得了 ４ ｇ ～ ｇ ｇ ５０ ｇ