应用Dot-ELISA快速检测牙鲆腹水病病原的研究.pdfVIP

第29卷第 3期 球 产 科 学 Vo1．29NO．3 2010年 3月 FISHERIES SCIENCE M ar．2010 应用 Dot—ELISA快速检测牙鲆腹水病病原的研究 朱壮春 ，陈 阳 ，郝东升 ，姜广建 ，邢朝斌 ， 吴 鹏 ，白崇洲 ，李金龙 ，史相国。 (1．华北煤炭医学院生物科学系 ，河北 唐山 063000；2．华北煤炭医学院 附属医院， 河北 唐山 063000；3．陡河水库管理处 ，河北 唐山 063000) 摘 要：选用硝酸纤维素膜作固相载体，建立检测迟钝爱德华氏菌的斑点酶联免疫吸附试验诊断方法。 根据棋盘试验，确定迟钝爱德华氏菌免疫血清最佳工作浓度为 l：800，酶标抗体最佳工作浓度为 1： 200，以出现明显清晰斑点者判定为阳性。用该方法检测时，迟钝爱德华 氏菌呈阳性，温和气单胞菌、 嗜水气单胞菌、河流弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌、腐败希瓦氏菌、产碱普罗威斯登菌、阪崎肠杆菌和大肠杆 菌均呈阴性。试验结果表明，Dot-ELISA方法简便、特异、快速、结果直观，便于在基层推广使用。 关键词 ：斑点酶联免疫吸附试验 ；牙鲆 ；迟钝爱德华 氏菌；快速检测 中图分类号：$948 文献标识码 ：A 文章编号 ：1003—1111(2010)03—0162—04 在水产养殖业中，迟钝爱德华氏菌(Edwards— 的温和气单胞菌(Aeromonassobria)、嗜水气单胞 iellatarda)是引起一些淡、海水养殖鱼类大批、快 菌 (A．hydrophila)、河流弧菌 (Vibriofzuvialis)、 速死亡的一种主要病原菌 ，在世界不少 国家和地 区 溶藻弧菌(．alginolyticus)、鳗弧菌(．anguil- 均有由该菌引起水产养殖动物病害的不同程度发 larum)、腐败希瓦氏菌(Shewanellaputrefaciens)、 生与流行 ，且损失严重L1蜘。在我国，牙鲆 (Parali- 产碱普罗威斯登菌(Providenciaalcalifaciens)、阪 chthysolivaceus)养殖近年来发展迅速，经济效益 崎 肠 杆 菌 (Enterobactersakazakii)、大肠 杆菌 十分显著。但病害问题十分突出，迟钝爱德华 氏菌 (Escherichiacoli)来 自上海水产大学和 中国科学 引起的感染病则是遭受损失严重 的病害之一 。唐 院微生物研究所。 山沿海牙鲆养殖业因牙鲆腹水病而损失严重，笔者 1．2 抗体与耗材 对 5起牙鲆腹水病进行了全面的研究，发现这 5起 HRP标记的羊抗兔 IgG、4-氯一1一萘酚 (4CN)底 病例均由迟钝爱德华氏菌单独感染引起 ，说明迟钝 物显色液和硝酸纤维素膜 (NCM)购 自北京赛驰生 爱德华氏菌是 引起牙鲆腹水病的主要病原[4]。检 物科技有限公司。迟钝爱德华 氏菌免疫血清 自制。 测迟钝爱德华氏菌用传统的微生物学分离培养技 制备过程 ：雄性大耳白兔 ，来 自北京维通利华实验 术费时费力，PCR法设备昂贵，又需专业人员操作， 动物技术有限公司。迟钝爱德华氏菌经 甲醛灭活， 不利于基层一线应用 。为此，笔者研究建立了一种 脱 甲醛后调整菌液密度为 1．8×10。个 ／ml作为抗 简便、快捷、经济且不需要精密仪器的斑点酶联免 原。大耳白兔饲养于屏障环境动物实验室，耳缘静 疫吸附试验 (Dot—EnzymeLinkedImmunosorbent 脉注射免疫，免疫分 7次进行 ，每次间隔 1周 ，微量 Assay，Dot—ELISA)快速检测法。