重组HBcAg激活p38MAPK信号通路增加髓源性树突状细胞IL-15的分泌-期刊.pdfVIP

ChinJCellMolImmuno1)2017．33(3 289 · 论著 · 文章编号：1007—8738(2017)03—0289—06 重组 HBcAg激活 p38MAPK信号通路增加髓源性树突状细胞 几．15的分泌 张鑫，周振华，李曼，高亚婷，孙学华，高月求 (上海中医药大学附属曙光医院肝病科，细胞免疫实验室，上海 201203) [摘 要] 目的 探讨重组人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)诱导髓源性树突状细胞 (mDC)分泌白细胞介素 15(IL一15)的机 制。方法 采用人单核细胞磁珠负分选试剂盒分选外周血单核细胞 ，采用粒细胞．巨噬细胞集落刺激因子(GM．CSF)、IL-4和肿 瘤坏死因子0L(TNF一)诱导分化为mDC，10 mLrhHBcAg刺激 mDC1—6d；分别用25p,mol／L磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B (PI3K／Akt)信号通路抑制剂LY294002、1,trmol／Lp38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂SB203580、100nmol／L c—JunN末端激酶(JNK)信号通路抑制剂 SP600125和 150nmol／L胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制剂 U0126预处理 1h， 再给予 10t~g／mLrhHBeAg刺激48h。之后收集细胞和细胞培养上清，实时定量PCR检测 IL一15mRNA水平，ELISA检测IL—l5 蛋白水平，Westernblot法检测PI3K／Akt和MAPK信号通路分子磷酸化水平。结果 与rhHBeAg未刺激组比较，rhHBeAg刺激 组IL-15mRNA和蛋白水平显著升高；与rhHBcAg刺激组比较，p38抑制剂预处理组IL．15水平明显降低，但H3K／Akt、JNK和ERK抑 制剂预处理组IL-15水平未见显著f生改变。结论 rhHBcAg通过p381~aPK信蜀函路 匕调外周血mDCIL-15的分泌。 [关键词]慢性乙型肝炎病毒感染 ；树突状细胞；乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)；白细胞介素 15(IL．15)；p38丝裂原激活蛋 白激酶(p38MAPK) [中图分类号]R392．12，11512．62，R446．61 [文献标志码]A RecombinantHBcAgpromotessecretion ofIL-15 in myeloid dendriticcellsv／a p38MAPK signalingpathway ZHANGXin，ZHOUZhenhua，LIMan，GAO Yating，SUN Xuehua，GAOYueqiu DepartmentofHepatology，ShuguangHospital，ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Shanghai201203，China Correspondingauthor，E—mail：gaoyueqiu@ hotmail．com lAbstractJ 0bjective TostudythemechanismbywhichrecombinanthumanhepatitisBviruscoreantigen(rhHBcAg) inducesinterleukin-15(IL-15)secretioninmyeloiddendriticcells(mDCs)．Methods Humanperipheralbloodmonocytes wereisolated frOm peripheraIblood ofhealthyvolunteersby DynabeadsUntouched Humanmonocyteskit．W eobtained mDCsbVculturingthemonocytesinthepresenceofGM ·CSF，IL-4 andTNF—a．1none group，mDCswerecultured in RPMl164OandstimulatedbyrhHBcAgatthefinaJconcentrationof10ug／mLf0r1，2，3，4，5，6days．Inanothergroup， mDCswereincubatedwith25pmol／LLY294002(PI3K／Aktinhibitor)