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两种交联剂制备软骨细胞移植支架的比较-中国医药生物技术
408 中国医药生物技术 2013 年 12 月第 8 卷第 6 期 Chin Med Biotechnol, December 2013, Vol. 8, No. 6
DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2013.06.002 ·论著·
两种交联剂制备软骨细胞移植支架的比较
綦惠,杰永生,陈磊,陶建峰,江建,孙磊
【摘要】 骨损伤已经成为有效的方法[5-7] 。支架的研究是自体
目的 试用两种交联剂对小牛真皮基质来源的支架材料进 软骨细胞移植技术的重要课题。为了使支架保持良
行交联,比较支架的细胞毒性、结构、生物相容性和细胞贴 好的弹性、强度和稳定性,交联是必不可少的步骤
附的差异,为在体动物试验提供实验依据。 之一[8-9] 。我们试用两种交联剂对小牛真皮基质来源
方法 将脱细胞真皮基质分为两组,分别浸入 0.05% 戊二 的支架进行交联,比较细胞毒性、生物相容性和间
醛溶液和 0.2% 水溶性交联剂进行交联,MTT 法检测细胞 充质干细胞(mesenchymal stem cells ,MSCs )在其
毒性和溶血率。将交联后的支架分别植入大鼠皮下,评价生 表面的贴附效果,为制备可用于 ACI 技术的新型
物相容性。以排液法粗测孔隙率,并在电镜下观察支架的结 支架提供实验依据。
构和孔隙大小。培养间充质干细胞并贴附于两种方法处理的
材料表面,电镜下观察贴附情况。 1 材料与方法
结果 以戊二醛溶液和水溶性交联剂两种方法处理的支架 1.1 材料
细胞毒性检测均合格,溶血率分别为 4.61% 与 2.97% ,均 1.1.1 实验动物和细胞 新西兰大白兔 1 只,雌
符合国家标准。经戊二醛交联的支架生物相容性差,炎症反 雄不限,体重 2.5 kg ,合格证号 SCSK (京)
应始终存在,水溶性交联剂处理的真皮基质组织相容性较 2010-0010 ;SPF 级 SD 大鼠 5 只,雌雄不限,体
好,仅有轻微的炎症反应。水溶性交联剂制备的支架材料孔 重 210 ~ 310 g ,合格证号 SCXK (京)2012-0001 ,
隙率为 84.3% ± 5.0% ,戊二醛制备的支架材料孔隙率为 均购自北京维通利华实验动物技术有限公司。L929
79.7% ± 10.8%,差异不具有统计学意义(P 0.05 )。戊二 细胞由本单位细胞室提供。
醛交联的支架细胞贴附差,而水溶性交联剂制备的支架细胞 1.1.2 主要试剂 脱毛剂、乙酸、SDS、PBS 、戊
贴附良好。 二醛、水溶性交联剂、苯酚等均为国产分析纯,购
自北京化工厂;DMEM 培养基、胎牛血清、胰蛋
结论 应用水溶性交联剂处理的支架细胞毒性和溶血率检
白酶均购自美国 Gibco 公司;二甲基亚砜(DMSO )、
测均合格,具有良好的生物相容性、孔隙率和细胞贴附性,
四甲基偶氮唑盐(MTT )、Ficoll 细胞分离液等均
该法可以作为后期制备软骨细胞移植支架的交联方法。
购自美国 Sigma 公司。
【关键词】 交联试剂; 支架; 材料实验; 细胞毒
1.1.3 仪器 C150 型细胞培养箱购自德国
性
Binder 公司;CKX31 型倒置相差显微镜购自日本
中
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