氧化铝固相萃取小柱在苦参生物碱含量测定中应用.docVIP

氧化铝固相萃取小柱在苦参生物碱含量测定中应用 　　摘要 该文使用中性氧化铝Cleanert Alumina-N-SPE小柱（0.5 g/6 mL），洗脱剂为三氯甲烷-甲醇（7∶3）5 mL，代替氧化铝开放柱（100～200目，5 g，内径1 cm），依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（7∶3）各20 mL进行洗脱对苦参药材供试液进行处理，该方法优化洗脱溶剂使用种类和数量，并优化了苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱含量测定的色谱条件，将2010年版《中国药典》中流动相条件乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液（80∶10∶10）优化为乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液（84∶6∶10）；简化了2010年版《中国药典》规定苦参药材供试液的前处理，缩短了样品处理时间，减少了洗脱溶剂，结果更为准确可靠，适合苦参药材中含量的测定，提高苦参药材中苦参生物碱含量测定的工作效率。 关键词 苦参；固相萃取柱；方法优化 收稿日期 2013-03-04 通信作者 *郭宝林，Tel：（010E-mail：guobaolin010@163.com 作者简介 杨霞，Tel：（0355）8096033，E-mail：yangxiaxy@ 苦参为常用中药，来源于豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根，具有清热燥湿、杀虫利尿之功效。苦参含有生物碱类、黄酮类等多种化学成分，其中生物碱类中的苦参碱（matrine）、氧化苦参碱（oxymatrine）是2010年版《中国药典》规定的苦参药材质量控制成分。文献报道苦参生物碱的含量测定方法中，大多参照2010年版《中国药典》方法[1-2]，部分用酸碱处理和液液萃取的方法[3-4]，也有直接提取液进样检测的报道[5-6]，但后者样液杂质多，影响色谱柱的寿命。固相萃取（SPE）是20世纪80年代发展起来的一项样品萃取技术。已经广泛应用于药品、代谢物、食品成分检测和环境监测等方面，但在药典中的中药样品前处理应用尚不够普及[7-10]。2010年版《中国药典》记载的苦参含量测定过程中采用开放的中性氧化铝萃取柱进行样品前处理，洗脱时间长，洗脱剂用量多，难以满足生产实践及科学研究中大量苦参样品的含量测定。本实验利用SPE柱代替中性氧化铝开放柱，旨在除去药材中的部分杂质以保护色谱柱的使用寿命；相比药典记载的中性氧化铝柱，SPE柱简化苦参药材前处理过程，提高工作效率。 1 材料 PerkineElmer高效液相色谱仪（Flexar LC pump，Flexar PDA Detector，Flexar Solvent Manager，Totalchron工作站）；Cleanert Alumina-N-SPE固相萃取柱（Agela公司）；SHANGPINGFA2104（1/1 万）电子天平。 乙腈（色谱纯，美国Honeywell公司）；娃哈哈纯净水；无水乙醇（色谱纯，天津市丰越化学品有限公司）；其他试剂均为分析纯。苦参碱、氧化苦参碱对照品为山西振东光明研究院制备，用于含量测定（面积归一法测定质量分数分别为99.84%，98.55%）。 苦参药材样品1～4来自于山西长治振东道地药材开发有限公司中药材公司苦参种植基地的不同采集点，样品5来自于河南卢氏野生药材，均由中国科学院药用植物研究所郭宝林研究员鉴定。 2 方法和结果 2.1 色谱条件及优化 Venusil XBP NH2色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），检测波长为220 nm。作者发现在2010年版《中国药典》记载的流动相条件下，即乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液（80∶10∶10），氧化苦参碱峰前位有杂质小肩峰，流动相条件调整为乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液 （84∶6∶10）时，氧化苦参碱和小峰的得到良好分离，氧化苦参碱的出峰时间仅加长了大约3 min，见图1。因此确定后者为本实验的色谱条件。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取苦参碱对照品25.0 mg， 氧化苦参碱对照品24.7 mg，分别加乙腈-无水乙醇 （80∶20） 溶解定容到50 mL量瓶中作为储备液，对照品色谱图见图1。 1.苦参碱；2.氧化苦参碱；A.对照品；B：药材。 图1 苦参碱和氧化苦参碱对照品的HPLC图 Fig.1 HPLC of matrine and oxymatrine reference substance2.3 固相萃取法制备供试液方法的建立 2.3.1 固相萃取法和药典样品处理方法的比较 药典样品处理方法参考文献[11]。 选择与2010年版《中国药典》方法使用填料量相近的Cleanert Alumina-N-SPE小柱（5 g/12 mL）代替中性氧化铝开放