流式细胞仪四色荧光标记技术在急性白血病免疫分型中临床应用.docVIP

流式细胞仪四色荧光标记技术在急性白血病免疫分型中临床应用 　　摘要：研究急性白血病免疫分型采用流式细胞仪四色荧光标记技术具有非常重要的临床意义，采用流式细胞仪四色荧光标记来对抗体中的T-ALL和B-ALL进行分析。诊断过程中对AML-Mo型的形态进行辨别，采用四色荧光标记技术可以对急性白血病的亚型和分化程度进行鉴别。四色荧光标记技术可以用较少的抗体，特异对白血病细胞进行白血病细胞免疫分型分析，以此来提高免疫分型的准确性，通过四色荧光标记技术可以直接对急性白血病免疫分型，可以快速、客观、多参数、定量和定性的分析出单个白细胞上的多种抗原表达情况，同时测定出膜浆抗原，更加深入的了解白血病的特异性，将其细胞的来源和分化阶段准确的判断出来，这些都符合治疗过程中的方案以及预后判断，有助于临床的治疗和预后判断。 关键词：流式细胞仪 荧光标记技术 白血病 免疫分型 Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.02.534 【中图分类号】R9 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）02-0360-01 白血病的免疫分型诊断已经成为了当前白血病诊断的必须要求，而四色荧光标记技术在免疫表分型的检测中发挥着越来越重要的作用，流式细胞术在白血病免疫细胞分型诊断时具有不可代替的作用，其具有特异性强、重复性好、客观和准确，降低了白血病形态学诊断的误诊率，采用CD45荧光强度组合设门技术对白血病免疫表型进行分析，研究四色荧光标记技术在急性白血病分型中的临床应用以及重要意义[1]。 1 四色荧光标记技术原理 采用荧光标记技术将标本中加入PC5并标记为CD45，然后通过标记的DNA序列完成对白血病免疫分型跟踪。从以前的间接荧光标记发展到现在的直接荧光标记，从以前的双色，三色发展到现在的四色标记。采用荧光标记检测技术主要是给样本试管中同时加入四种荧光标记的免疫抗体，这样可以同时检测出一个细胞上是否表达四种表面抗原或者是胞浆抗原，然后再通过流式细胞一起测定出前向角反射和侧向角反射，这两个参数分别代表了细胞的大小和颗粒性[2]。那么在采用流式细胞仪四色荧光标记技术在测定白细胞免疫分型中可以同时检测到6个参数，从根本上达到对白细胞的多个参数分析，从而提高免疫分型的水平。 2 ALL免疫表现型特点 2.1 T-ALL表现。由于CD45的荧光强度要较之正常的淋巴细胞表现弱，但是其很少表达阴性，SSC值表达与正常的淋巴细胞相似，幼稚细胞表达出T细胞的标志，而B和髓细胞表达的标志呈阴性。如果检测过程中疑似T-ALL那么则要做相应的CD3/CD45/CD4/CD8，同时还要做浆膜的CD3检查来进行确诊[3]。 2.2 B-LL表现。白细胞中的CD45荧光强度比正常的淋巴细胞弱或者表现呈阴性，SSC值与正常的淋巴细胞相似，而抗体CD34/CD45/CD19/CD10是诊断B-LL的关键所在。检测中T细胞以及髓细胞均呈阴性，而幼稚细胞的表达为CD34/CD19/CD10/HLA-DR，CD117表达为阴性，这就可以确诊B-LL。 3 AML-Mo分型表现 幼稚细胞中的SSC值与正常的淋巴细胞比较来看较为相似或者是稍高，所使用的CD45荧光强度与粒细胞相似。检测中多数细胞抗原表达为CD34、HLA-DR、CD7、CD117、CD13或者是CD33±，其他的T/B系标志为阴性，对于此类检测的患者要给予胞浆髓过氧化酶检查。如果检测出CD7呈现阳性则需要使用CD3胞浆进行确诊，诊断中如果出现POX显阴性，而且免疫细胞分型检测T和B均属于阴性，髓系标志表达2个以上，则诊断为AML-Mo。另外在检测中还会出现AML-M的其他表现型，其表达均具有一定的差异性。 4 白细胞免疫分型抗原介绍 白细胞免疫分型的抗原细胞存在于不同分化阶段的抗原，其表达也是不同于正常细胞的系列，对白血病和淋巴细胞的诊断往往是根据其分化的抗原表达异常进行判断[4]。例如某造血干细胞和祖细胞的标志或者是某个系列的抗原阳性细胞异常增多，当前所选用的抗原以及其系列的特异性均不是一成不变的。当前CD系列的抗原很多，选用多种的抗原来对抗体进行标记诊断，此时其诊断的造价也相对较高。所以在对白细胞免疫分型的诊断中如何做到经济而准确的诊断是当前需要解决的难题[5]。近年来的CD45系列抗原存在着三种的异构体，不同的异构体之间祖细胞、造血干细胞、T细胞、B细胞的表达不一样，由于CD45在单核细胞、淋巴细胞、单核细胞和幼稚细胞的表达量不同，其表现的荧光强度也不一样，诊断检测的过程中可以根据其强度程度与SSC值将骨髓细胞分为单核细胞、淋巴细胞、粒细胞以及幼稚细胞群等，其他的设门不能将其进行分开，而采用CD45和SSC进行设