亲和标签在重组蛋白表达与纯化中的应用.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（１２）：９３１０３ 亲和标签在重组蛋白表达与纯化中的应用 １ １ １，２ 陈爱春 　彭　伟 　汪生鹏 （１江苏科技大学生物与化学工程学院　镇江　２１２０１８） （２中国农业科学院蚕业研究所 农业部蚕桑遗传改良重点实验室　镇江　２１２０１８） 摘要　亲和标签融合技术为重组蛋白的纯化提供了一种简单方便的纯化工具，具有结合特异性 高、洗脱条件温和、通用性强、纯化倍数高等显著优点。概述了亲和标签对融合蛋白表达的影响， 可以提高重组蛋白的产量，增强重组蛋白的可溶性，促进重组蛋白的正确折叠；回顾了在重组蛋 白表达与纯化中广泛使用的几种亲和标签，以及近年来相继出现的几种比较新颖的纯化标签；介 绍了亲和标签的组合使用策略，ＨｉｓＭＢＰ组合标签集合了两个标签的优点，串联亲和纯化可以纯 ６ 化获得生理条件下的蛋白质复合体；展望了亲和标签未来的发展趋势，认为仍需继续开发性能更 加优越、纯化效果更加显著的纯化标签系统。 关键词　亲和标签　重组蛋白　融合表达　亲和纯化 中图分类号　Ｑ８１９ ［３］ 　　在结构蛋白质组学研究、蛋白质微阵列芯片技术 重组蛋白纯化工艺的开发中 。 及重组功能性蛋白质生产中，必须首先获得大量高度 ［１］ １　亲和标签对融合蛋白的影响 纯化且正确折叠的蛋白质 ，以便后续对其结构、功能 及相互作用进行系统分析，实现功能性蛋白质产品的 　　从蛋白质结构与功能的基础研究到功能性蛋白质 ［３］ 商业化。然而，由于来源成分复杂、理化性质各异、结 表达与纯化工艺的开发 ，亲和标签已经成为重组蛋 构功能多样，蛋白质的纯化一直是结构蛋白质组学研 白纯化的一个重要且有效的工具。它们不仅便于对融 究与生物技术产品开发中的一个瓶颈问题，严重制约 合蛋白的检测与纯化，而且可能对目标蛋白的理化性 了后续的结构分析、功能验证和功能性蛋白质的产 质产生有利的影响，可以提高重组蛋白的产量，增强重 品化。 组蛋白的可溶性，促进重组蛋白的正确折叠。 　　生物物质，特别是酶和抗体等蛋白质，具有识别某 １．１　提高重组蛋白的产量 种特定物质并与该物质分子特异性结合的能力。基于 　　在使用亲和标签进行融合表达的过程中发现，位 生物分子间的这种特异性结合作用而形成的亲和纯化 于目标蛋白Ｎ端的某些亲和标签，如谷胱甘肽Ｓ转移 ［２］ 技术，已广泛应用于蛋白质，特别是重组蛋白的分离纯 酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴ） 、麦芽糖结合蛋白 ［３］ 化中。在重组蛋白的亲和纯化中，利用基因工程技术， （ｍａｌｔｏｓｅｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＭＢＰ） 、泛素 （ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ， 将经过改造优化的亲和标签与目标蛋白融合表达，通 ［４］ Ｕｂ） 、小泛素相关修饰蛋白（ｓｍａｌｌｕｂｉｑｕｉｔｉｎｒｅｌａｔｅｄ 过一步简单快速的亲和层析，直接获得纯度较高的重