生物固氮作用机理.doc

植物学通报 1997, 14 ( 3) : 1～ 13 C h ine se B u lle t in o f Bo tany Ξ 生物固氮作用机理 李佳格 徐继 ( 中国科学院植物研究所, 北京 100093) M ECHA N ISM O F B IOLO G ICAL N ITRO GEN F IXA T IO N L i J ia2ge X u J i ( I ns t itu te of B otany , C h inese A cad em y of S c iences, B e ijing 100093) 氮肥对提高农作物的产量具有重要作用, 然而氮肥又往往是有限的。全球每年可供利用的 还原态氮中约有 60% 来自生物固氮, 工业合成氨则约占 25% , 其余 15% 则产生于闪电等 ( K im 等, 1994)。 由于世界人口的增长, 人们对粮食的需求量不断增加, 粮食的增长又直接与 氮肥的供应相联系。虽然大气中氮的量是充足的, 但氮是惰性很强的气体, 工业合成氨需要在 400～ 500℃的高温, 和 200 a tm 高压及铁催化剂条件下才能进行, 不但消耗大量能源, 而且连 年施用化肥, 其残留物在土壤中的累积, 污染了河流和地下水源。而生物固氮则可以直接利用 空气中的氮, 在常温常压下将其还原成氨。 生物固氮作用存在于一些原核生物中, 已经鉴定 为固氮生物的有古细菌 2 个属中约 87 个种, 细菌的 38 个属和氰细菌的 20 个属 (D ixo n 等, 1986) 。虽然有固氮能力的种属占的比例很小, 但分布范围很广, 在大多数的生态环境中都会 有一两个固氮种的代表。 这些固氮生物都是生态系统中氮循环的重要组成部分。如何发挥生 物固氮的潜力以满足对氮肥的需求, 并减少生产氮肥所带来的能耗及对环境的污染, 保存人 类良好的生态环境都具有深远意义。 固氮生物体内能将空气中氮还原成氨的生物催化剂是固氮酶。 因此了解固氮酶的性质和 作用机理, 是生物固氮研究的核心问题。 近 20 年来, 固氮分子生物学和生化研究的结合, 以及 近年报道的固氮酶两组分的晶体结构衍射的结果, 使人们对固氮作用的机理有了全新的认 识, 本文将着重介绍这方面研究的新进展。 固氮酶的性质 固氮酶已从多种固氮生物分离和纯化, 包括从严格厌氧的固氮微生物到能放氧的固氮蓝 藻, 以及从共生到自生。虽然来源不同, 但固氮酶的性质都非常类似, 这方面工作国内外都有不 少综述 (Y a te s, 1992; 陈因, 1992; 尤崇杓, 1995 及 1987; 宋未, 1987; 姜涌明, 1987) )。 (一) 固氮酶的组分 Ξ 本文曾作为“纪念 1956 年全国植物生理教学讨论会四十周年”会议交流资料。 1965 年首次以巴氏梭菌 (Cp ) 为材料, 分离纯化得到了固氮酶的两个蛋白组分, 即铁蛋白 (F e 蛋白) 和钼铁蛋白 (M o F e 蛋白) , 铁蛋白分子量约 60KD , 是由两个相同的亚基组成的二聚 体, 含一个 4F e24S 簇, 桥联于两个亚基之间。钼铁蛋白分子量约 220KD , 由 Α2 Β2 组成四聚体, 含 2 个 M o 约 32 个 F e 和等量的 S22原子。 这些金属形成两个特殊的 4F 24S 簇 (称 P 2簇对) 和 两个铁钼辅因子 (F eM o 2co ) (Sh ah 等, 1977)。 上述两个蛋白组分单独存在时不呈现固氮活 性, 只有组合在一起时, 在一定条件下才有固氮功能。 在文献中常出现固氮酶两组分蛋白的不同命名方式, 经常采用的除 F e 蛋白和M o F e 蛋 白是以其中所含金属而命名外, 又常采用其在分离纯化时通过 D EA E 柱层析洗脱下来的顺序 而定名, 即组分 1 (M o F e 蛋白) 和组分 2 (F e 蛋白)。为区别来源于不同固氮生物的固氮酶, 因 此将其前面加上属、种的第一个字母, 例如 A v1 表示棕色固氮菌 A z otoba c te r v in e la n d ii 的 M o F e 蛋白, Cp 2 表示巴氏梭菌 C los t r id ium p a s teu r ia n um 的 F e 蛋白等等。 来源于不同固氮生物的固氮酶铁蛋白和钼铁蛋白若交叉组合, 则约有 85% 可以表现出固 氮活性 (E van s 等, 1992) , 表明固氮酶之间有明显的同源性。而生理类型和亲缘关系远的, 如 好气菌 A v 与厌氧菌 Cp 的组分蛋白之间互补, 则没有固氮活性。说明来源不同的固氮酶的性 质和作用机理都类似, 但也存在着一定的差异。 (二) 稳定性 固氮酶两组分蛋白都对氧极