细胞分子生物学（扬州大学）第五章 DNA复制.pptVIP

第五章 DNA 复制 第一节概述 DNA半保留复制模式的基本要点为： 双链DNA的两条链带有相同的遗传信息，其碱基序列呈互补关系 在DNA复制开始时，两条母链分离，分别作为DNA拷贝的模板，然后在DNA聚合酶催化下，按照碱基配对原则，以５?→３?方向指导子链DNA的合成，因此新生双链DNA的一条链总是来自母链 在细胞分裂期，新合成的双链DNA分子被均等地分离到子代细胞中 DNA复制只能以５→３方向进行 半不连续复制模式认为DNA的一条链（前导链）以５’→３’方向从复制原点开始连续复制，而另一链（后随链）以５’→３’方向朝着复制原点后退的方式合成，产生岗奇片段（Okazaki fragment）。随着复制叉的前移，先导链以连续的长链合成，后随链以间断方式和相反方向合成若干个片段，然后由DNA连接酶连接成一条完整的链 在DNA的半不连续复制模式中，前导链和岗奇片段５?-端的前几个核苷酸实际上是RNA，此RNA作为DNA合成的引物 在合成的DNA片段连接之前,RNA引物要被去除，产生的空隙用DNA填补 以RNA引物启动DNA合成的目的是保证DNA复制的高度保真性 第二节 细菌DNA的复制 一、细菌基因组DNA的复制 细菌基因组为单个环形复制子 复制原点负责复制的启动及其频率的控制 靠近复制原点的序列负责已复制基因组向子代细胞的分离 大肠杆菌基因组的复制从单个复制原点处以双向同时进行 DNA的合成过程可分为起始、延伸和终止三个阶段 二、起始阶段 辨认起始点，合成引发体：E.coli复制起始点oriC的特定结构能被DnaA蛋白辨认和结合，DnaB蛋白具有解螺旋作用，DnaC蛋白使DnaB蛋白结合于起始点，DNA双链局部被打开，引物酶及其他蛋白加入，形成的引发体（primosome）是由DnaA蛋白、DnaB蛋白（解螺旋酶）、DnaC蛋白、引物酶和DNA的起始复制区域共同形成的一个复合结构 形成单链：DNA进行复制时，首先在拓扑异构酶作用下，使分子的超螺旋构象变化，然后在解链酶的作用下解开双链，才能开始进行DNA的合成。解螺旋酶在蛋白因子的辅助下打开DNA双链，单链结合蛋白SSB结合于处于单链状态模板链上；拓扑异构酶使DNA分子避免打结、缠绕等 三、延伸阶段 复制方向：E.coli等原核生物只有1个复制起点oriC，两个复制叉同时向两个方向进行复制，称为双向复制 链的延长：按照与模板链碱基配对原则，在DNA聚合酶III的作用下逐个加入脱氧核糖核酸，使链延长 由于DNA双链走向相反，DNA聚合酶只能催化核苷酸从5’→3’方向合成，前导链的复制方向与解链方向一致，可以连续复制；后随链沿5’→3’方向解开，复制方向与解链方向相反，复制只能在模板链解开一定长度后进行，合成是不连续的，形成的是若干个岡崎片段 四、终止阶段 E.coli的两个复制叉的汇合点就是复制的终点，此处附近有几个DNA复制终止部位，能与tus基因产物（DnaB螺旋酶抑制物）结合，从而阻止复制叉移动 由RNA酶切去前导链和后随链中的引物，留下的空隙由DNA聚合酶I催化，以脱氧核糖三磷酸为原料以5’→3’方向延长填补 最后DNA连接酶由ATP供能，将两个不连续片段相邻的5?-P和3?-OH连接起来，成为连续的子链，复制完成 复制完成后，两个子代环形DNA分子保持连接状态，然后由拓扑异构酶IV将其解开，最后随细胞膜吸附部位的移动而分离到两个子代细胞中 第三节 真核细胞DNA的复制 一、细胞周期 所有真核细胞均有明确的细胞周期, 直至细胞分裂结束 G1期:细胞周期中最长的时期,为DNA复制作准备 S期:细胞周期中唯一的DNA复制期 G2期:有丝分裂前的短暂间隔期 M期:即有丝分裂期,已复制子代染色体分离到分裂细胞中 间期:包括G1、S 、G2期 二、DNA 复制的启动 20-50个复制子在S期确定的时间同时启动复制 转录活跃区DNA(常染色质)先行复制，异染色质DNA后复制，着丝点和端粒最后复制 支持酵母复制的最短DNA为11bp，被周期素依赖的、蛋白激酶（CDKs）激活的复制原点识别复合物(ORC)包裹，使得DNA双链打开和进行拷贝 哺乳动物细胞DNA复制原点序列尚未明确，每一复制子的启动可能在复制启动区内随机发生 在每一细胞周期中，真核细胞复制子的复制只能启动一次 参与复制启动的准许因子(licensing factor) 使用一次后即失活，而且仅在有丝分裂期核膜溶解时才能进入细胞核，从而防止不成熟复制的重新启动 三、复制延伸 在DNA拷贝前，复制叉处的DNA必须从核小体上解开 双链的解开需要DNA螺旋酶、单链结合蛋白(SSB)和复制蛋白A(RP-A)的参与 三种DNA聚合酶参与DNA复制的延伸：以RNA为引物的前导链和后随链片段的复制由引发酶启动，引发酶是DN