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猴头菇多糖提取方法的比较张素斌，黄劲峥(肇庆学院化学化工学院，广东 肇庆，526061)摘 要 比较猴头菇多糖的几种提取方法。以猴头菇为原料，分别用热水提取法、超声波法、纤维素酶法、木瓜 蛋白酶法、果胶酶法、复合酶法、超声复合酶法提取多糖，用苯酚-硫酸法测定猴头菇多糖含量，并对这几种方法 的最佳提取条件和提取率进行了比较。结果表明: 在最佳提取条件下，超声波法的多糖提取率为 6. 41% ，热水提 取法为 5. 80% ，纤维素酶法为 10. 20% ，木瓜蛋白酶法为 9. 77% ，果胶酶法为 7. 94% ，复合酶法为 10. 89% ，超声 复合酶法为 15. 59% ，超声与复合酶法的协同作用可使多糖提取率大为提高。关键词 猴头菇，多糖，热水提取，超声，酶法，超声酶法，比较猴头菇又名猴头蘑、猴头菌等，因其子实体形状 像猴子头部而得名，是著名的药食两用菌。猴头菇多 糖为猴头菌中的最主要的活性物质，研究表明，猴头 菇多糖具有提高免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂等生 理功能，可广泛应用于医药及保健食品领域［1］。据 文 献 报 道，提取猴头菇多糖的方法有热水提取 法［2 － 4］，超声波提取法［5 － 6］，酶法提取［7 － 8］等，未见使 用超声酶法提取猴头菇多糖的方法，而且这些方法之 间缺乏比较。本文以猴头菇为原料，分别用热水提取 法、超声波法、纤维素酶法、木瓜蛋白酶法、果胶酶法、 复合酶法以及超声复合酶法提取猴头菇多糖，对这些 提取方法进行优化并比较各法的提取条件及多糖提 取率。1材料与方法1. 1材料与试剂猴头菇，产自福建古田; 纤维素酶( 2 000 IU / g) 、木瓜蛋白酶 80. 0 万 IU / g、果胶酶 2. 0 万 IU / g，北京 鸿润宝顺科技有限公司; 苯酚，葡萄糖、浓 H2 SO4 、乙 酸锌、亚 铁氰化钾、CuSO4 、次 甲基蓝、酒 石酸钾钠、 NaOH、HCl 均为分析纯。1. 2实验仪器S22PC 可见分光光度计( 上海棱光技术有限公 司) ，SK8200H 台式超声清洗仪( 上海科导超声仪器 有限公司) ，HH-S2 系列恒温水浴锅( 江苏省金坛市 环宇科学仪器厂) ，AUY120 电子分析天平( ShimadzuCorporation Japan) ，pHS-29A 型酸度计( 上海大普仪 器有限公司) 。1. 3实验方法1. 3. 1样品处理将样品粉碎，过 30 目筛，密封备用。经测定，样 品的水分含量为 8. 04% 。1. 3. 2提取方法热水提取法: 样品按料液比加水，恒温水浴提取; 酶法提取: 样品加入酶、HAc-NaAc 缓冲溶液，恒温水 浴提取，加热灭酶; 超声波提取法: 样品加入水后超声 提取; 超声复合酶法: 样品加入酶、HAc-NaAc 缓冲溶 液，恒温水浴提取，加热灭酶，冷却，再超声提取一定 时间。将提取液冷却、定容，过滤后得滤液备用。 1. 3. 3葡萄糖标准曲线的绘制准确吸取 0. 1 mg / mL 葡萄糖溶液 0、0. 2、0. 4、 0. 6、0. 8、1. 0、1. 2 mL，置于试管中，各加入蒸馏水使 总体积为 2. 0 mL，再加质量分数 5% 的苯酚溶液 1 mL，摇 匀，迅 速 加 入 浓 H2 SO4 5mL，摇 匀，放 置 10 min，沸水 浴加热 15 min，取 出流水冷却至室温，于488 nm 波长处测定吸光度 A，得出 A 与浓度 c ( mg / mL) 的回归方程 A = 6. 852c － 0. 028，r = 0. 991。1. 3. 4猴头菇还原糖与蔗糖等低聚糖含量的测定吸取各法所得提取液适量，置于 100 mL 容量瓶， 加入醋酸锌和亚铁氰化钾各 5 mL，以水定容，静置 30 min，过滤。吸取 50 mL 滤液至 100 mL 容量瓶中，加 入 5 mL 6 moL / L HCl，68 ～ 70 ℃ 水浴加热 15 min，取 出冷却，加 2 滴甲基红，滴加 20% NaOH 中和，定容，［9］第一作者: 硕士，讲师。收稿日期: 2013 － 12 － 10，改回日期: 2014 － 02 － 15摇匀，按直接滴定法如下:测定还原糖含量。计算公式还原糖与蔗糖等低聚糖含量/ % = F × n × 100 × 100m × V × 1 000式中: F 为 10 mL 碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄 糖的质量，mg; n 为稀释倍数; V 为滴定消耗样液的体 积，mL;m 为样品质量，g。1. 3. 5多糖提取率计算样品提取液经适当稀释，准确吸取 1 ～ 2 mL，按 1. 3. 4 的方法显色测定，计算公式如下:总糖含量 /% = c × n × V × 100m × 1 000式中: c 为样液总糖