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活性蛋白整体方案 Active Protein Solutions 蛋白表达与纯化专题 蛋白表达通常是指生物体内蛋白质的合成、修饰以及调控过程。在表达系统的相关研究中 ，表达是指利用基因重组 技术表达蛋白质的过程。本文主要关注后一个话题 ，着重阐述重组蛋白生产过程中的主要细胞机制。 蛋白表达与纯化简介 蛋白在细胞内的合成和调控取决于功能的需求 ，蛋白质的遗传信息 都储存在 DNA 的模板中 ，并由转录过程中产生的信使 RNA （mRNA ）进行解码 ，遗传信息通过一个 mRNA 编码 ，然后翻译 为蛋白质。转录是指遗传信息从 DNA 传递到 mRNA 的过程 ，而 翻译是指蛋白通过 mRNA 指定的序列进行合成的过程。 转录和翻译的简略示意图 ，描述了从 DNA 碱基对序列 （基因 ）到形成氨基酸多肽序列 （蛋白质 ）的过程。 在原核细胞中 ，转录和翻译是同时进行的。翻译甚至在成熟的 mRNA 转录产物完全合成前就已经开始了。这种转 录翻译同时进行的方式被称为转录翻译的耦合 （coupled ）。而在真核细胞中 ，转录发生在细胞核内 ，翻译或蛋白 合成的场所则是在细胞质中 ，俩者是分开且依次发生的。 真核和原核的转录翻译对比图 转录 原核生物和真核生物的转录的过程都包括三个步骤 ：起始 ，延伸和终止。当双链 DNA 解旋并与 RNA 聚合酶结合 时转录开始。一旦转录开始 ，RNA 聚合酶就会从 DNA 中释放出来。转录的过程的调控依赖激活蛋白和阻遏蛋白 ， 同时也与真核的染色质结构有关。在原核生物中 ，mRNA 的原始转录产物一般不需要加工修饰 ，翻译往往在转录 Tel: 025 5889-4959 www.DetaiB Order@DetaiB （ ） 活性蛋白整体方案 Active Protein Solutions 完成前就开始了。然而真核细胞中 ，原始转录产物则需要进一步的加工——除去内含子 ，mRNA 的 5′端添加 “帽 子” ，mRNA 3′末端在多聚腺苷酸聚合酶参与下加上了一段多个腺嘌呤序列 （poly A 尾 ）。修饰后的 mRNA 移动 到细胞质中进行翻译。 翻译 翻译或蛋白的合成是一个复杂的过程 ，包括起始 ，延长和终止三个步骤。整个过程需要生物大分子的协同作用 ，如 核糖体 ，转运 RNA （tRNA ），mRNA 等 ；同时还需要很多的蛋白因子和小分子蛋白 ，如氨基酸 ，ATP ，GTP以 及其它辅助因子。这些特殊的翻译因子存在于翻译的每一步中 （详情见下表 ）。原核和真核的翻译过程整体上是相 似的 ，但在部分过程中依然存在着区别。 在起始阶段 ，核糖体的小亚基会引发 t-RNA 扫描 mRNA ，识别并结合 mRNA5端的起始密码子 （AUG ）。核糖体 的大亚基和小亚基在起始密码子处链接并形成起始复合物。蛋白因子和 mRNA 参与到起始密码子的识别和起始复 合物形成的过程中。延长阶段 ，tRNA 会结合到特定的氨基酸上 （这通常被称为 tRNA 的装载作用 ）并在核糖体中 聚合形成肽 ，氨基酸通过转录产物的 mRNA 序列不断添加到正在增长的肽段中。最终 ，新生多肽在终止密码子处 停止翻译。同时 ，核糖体释放 mRNA ，准备开始新一轮的翻译。 蛋白合成 原核生物与真核生物翻译过程中的主要组成部分概述 组成 原核 真核 核糖体 30S和 50S亚基 40S和 60S亚基 转录后 ，mRNA 除去非编码区 （内含子 ），并且在 mRNA 的 5’端和 3’