家族型肌萎缩侧索硬化动物模型腰段脊髓前角细胞雄激素受体的表达特征Expression of androgen receptor in the anterior horn cells of the lumbar spinal cord of the familial amyotrophic lateral sclerosis animal model.pdfVIP

目录 燃／3／／N5 中文摘要…………………………………………………．．：：．：：：：：：．：·i1．-．．丁．= 中文摘要 家族型肌萎缩侧索硬化动物模型腰段脊髓前角细胞雄激素受体 表达特征 摘 要 lateral 目的：肌萎缩侧索硬化(amyotrophic 病因未明神经系统变性病，选择性损伤大脑皮层运动神经元、脑干运动神 经核神经元、脊髓前角a运动神经元，导致进行性加重的肌肉无力、萎缩， 最终因呼吸肌麻痹死亡。有许多流行病学的危险因素，例如暴露于重金属、 电或机械损伤、剧烈的体育活动都会影响到肌萎缩侧索硬化(ALS)的发 病。但是还有两个广为接受的危险因素：年龄和性别。研究表明男性发病 率高于女性，49岁以前男女发病率之比为3．98：1，55岁以后男女发病率 转基因小鼠的发病时间雄性早于雌性，生存时间雌性大于雄性【2】，说明性 别可能是其ALS发病的危险因素，性激素可能对ALS发病过程中神经元 的变性、丢失发挥作用。 另有研究发现ALS患者男性以肢体发病为主，女性以球部发病为主 [1l。肯尼迪病是一种X．连锁的雄激素受体基因突变引起的运动神经元病， 主要影响高位颈髓及延髓的下运动神经元，以上肢发病常见【3】。家族性肌 成年(12周左右)发病，后肢运动功能障碍并逐渐进展至终末期(17．20 周)【4】。目前有关雄激素受体(AR)在ALS小鼠脊髓表达情况的报道少 见。 本实验应用免疫荧光的方法，观察家族型肌萎缩侧索硬化动物模型 分布情况，应用免疫组化的方法计数家族型肌萎缩侧索硬化动物模型 动神经元雄激素受体的表达情况，旨在探讨ALS的发病过程中雄激素受体 的作用，为ALs发病机制研究提供一定的理论基础。 方法： 1模型建立及分组 中文摘要 pathogen 非SODlG93A转基因鼠。 参考Vercelli At5】等的1—5分评分法进行评分，4分为发病时间，1分 为死亡时间，60天为症状前期，4分为症状早期，1分为终末期。各对照组 为同窝、同月龄未转人突变的SODl基因的小鼠。每组雌雄各3只小鼠。 2取材 20min，取小鼠腰段脊髓，以4％多聚甲醛固定48h。 3免疫荧光 后固定的组织块震荡切片251am厚，应用免疫荧光三标染色的方法在 激光共聚焦显微镜下观察雄激素受体在SODlG93A转基因小鼠腰段脊髓 前角中的细胞定位。 4免疫组化染色 AR免疫组化染色，计数脊髓前角运动神经元数量及观察运动神经元AR 受体表达。脊髓前角a运动神经元数量的计数方法：对连续切片的每第五 张切片的双侧脊髓前角的O【运动神经元计数，每段腰髓观察10个切片。 被计数的a运动神经元标准为：位于前角、直径25“m，细胞核清楚【6】。 5统计学处理 采用SPSS13．0统计学软件对数据进行统计处理。采用均数±标准差 表示腰膨大脊髓切片两侧神经元计数之和，三组数据的比较采用单因素方 差分析，两组数据的比较采用两个独立样本比较的t检验，以a--0．05为显 著性检验标准。 结果： 1模型建立 中文摘要 的PCR产物，为非SODlG93A转基因鼠。 2免疫荧光 浆，而星型胶质细胞和小胶质细胞均无雄激素受体表达；对照组与ALS小鼠 一致(Fig．2)。 3免疫组化染色(SMI．32) SODlG93A转基因雄性小鼠在症状前期、发病期、终末期神经元计数 性小鼠在症状前期、发病期、终末期神经元计数分别为20．60±3．20、 1．000，仅发病期差别有统计学意义(Fig．5，Table3)。 4免疫组化染色f铷蚰 运动神经元，且位于胞浆，胞浆着色均匀一致，随病情进展，未出现颗粒 样沉积。对照组与ALS小鼠一致(Fig．6)。 4．2 SODlG93A转基因雄性小鼠在症状前期、发病期、终末期神经元 1．23，各组比较P值分别为 计数分别