高效毛细管电泳中的电渗流及控制.docVIP

第 21 卷第 2 期 2000 年 6 月 淮 北 煤 师 院 学 报 Vol . 21 No . 2 Jo ur nal of Huaibei Coal Indust ry Teachers College J un . 2000 高效毛细管电泳中的电渗流及控制 李 敏 ( 滁州师专化学系 ,滁州 239012) 摘 要 :本文讨论了高效毛细管电泳分析中的电渗流及影响因素 ,介绍了几种控制电渗流的方法 , 并探讨了机理. 关键词 :毛细管电泳 ;电渗流 ;控制方法 分类号 :O657 . 8 文献标识码 :A 文章编号 :1000 - 2227 (2000) 02 - 0039 - 42 引言 高效毛细管电泳 ( HPC E) 是近十多年来迅速发展起来的一种分离分析技术. 它是基于带 电组分在高电场中迁移率不同而进行分离的. 由于电泳是在极细毛细管 ( 50～100μm i . d. ) 中 进行的 ,因此随之产生了另一种电动现象 ———电渗. 在毛细管电泳 ( C E) 中 ,电渗起着举足轻重 的作用 ,所以电渗流 ( EO F) 的控制是 C E 中的一大关键 . 1 电渗流的产生及影响因素 在 C E 中 ,由于石英毛细管内壁上的硅羟基团 ( —SiO H) 电离成 SiO - 使表面带负电荷 ,负 2 电荷表面在溶液中积聚相反电荷的对离子形成双电层. 处于扩散层中的阳离子在负电荷表面 形成一个圆筒形的阳离子鞘. 在高电场作用下 ,双电层中这个阳离子鞘相对毛细管内壁运动 , 引起整个流体向阴极移动 ,形成电渗流. 电渗流具有平面流型 ,在缩短分析时间的同时不引起 样品区带的额外展宽 ,因而可获得高分离度. 多数情况下 ,电渗流速度比电泳速度快 5 - 7 倍 , 强大的电渗流能使正负离子同向迁移 ,从而实现正负离子的同时分离分析. 电渗流的大小可用速度 ( veo) 或淌度 (μeo) 来表示 : 其中ζ:zeta 电势 ;ε:介质的介电常数 ;η:介质的粘度. 由 ( 1) 式可见 , veo 取决于ζ、ε、η、E 等四个量 . 其中 zeta 电势是影响 EO F 速度的直接因 素 ,而 zeta 电势与毛细管表面特性 ,缓冲液性质密切相关. 有实验表明 ,zeta 电势与扩散层厚度 成正比1 ,而扩散层厚度又正比于电解质浓度的平方根倒数2 . 因此 ,缓冲液的组成 、p H 、温度 以及毛细管内表面的状态成为影响电渗流的间接因素. 收稿日期 :2000 —03 —03 作者简介 :李 敏 ( 1957 - ) ,女 ,安徽全椒人 ,学士 ,讲师 电渗流的控制 电渗一直伴随着电泳过程 ,在不同的 C E 模式中 ,对电渗流的大小有不同的要求. 在区带 电泳中 ,为了使正负离子同时分离 ,需要较大的电渗流 ,但还需考虑分离度 ; 在胶束电动色谱 中 ,通常需要强大的流向阴极的电渗流作为组分和胶束向阴极运动的推动力 ;在凝胶电泳和等 电聚焦电泳中 ,必须尽可能地消除电渗流. 因此 ,电渗速度直接影响 HPC E 的分析速度 、效率 和重现性. 通过 EO F 大小和方向的控制 ,可以优化 C E 分离. 3 . 1 改变缓冲溶液的特性 不同的缓冲溶液 ,其离子强度不同 ,可导致 ζ、ε、η值的差异 . 有的实验表明[ 3 ] , 在碱金属 醋酸盐缓冲液中 , v eo随 Li + 、Na + 、K + 、Rb + 、Cs + 半径递增而逐渐减小 ;而李红旗等4 实验得出 结论 ,一价碱金属离子 Li + 、Na + 、K + 对电渗速度影响相差不大. 这说明 ,通过改变缓冲液离子 种类 ,在不同的测定中 ,对 v eo影响是不同的. 缓冲液的 p H 影响管壁基团的解离度 ,能明显改 变 v eo . 有人认为4 ,5 , veo随 p H 呈线性增加 ,而有些作者却发现 ,在低 p H 下 ( 2 - 3) ,由于硅羟 基质子化作用 ,负电荷表面被 H + 中和 ,使 zeta 电势趋于零 ,p H 10 时 ,硅羟基基本解离 ,电渗 变化很小 , veo随 p H 变化曲线类似于强碱滴定弱酸的滴定曲线6 - 8 ;p H 在 4 - 6 范围对 EO F 影响显著6 ,这说明在不同的缓冲体系中 , veo 随 p H 的变化规律有所不同. 但可看出 EO F 对 p H 表现出较强的依赖性 ,通过缓冲溶液 p H 的调节可以使 EO F 在接近 0 - 1 ×10 - 3cm2 / v. s 之 间变化9 . 在缓冲液中加入添加剂 ,如中性盐 ,两性离子 ,表面活性剂以及有机