嗜热芽孢杆菌高温蛋白酶HS08的化学修饰研究 Chemical Modification of a Protease HS08 from Thermophilic Bacillus Strain.pdfVIP

嗜热芽孢杆菌高温蛋白酶HS08的化学修饰研究* 黄光荣1，2 应铁进1 戴德慧2 活 泼2 蒋家新3 l(浙江大学生物系统工程与食品科学学院，杭州，310027) 2(浙江科技学院生物与化学工程学院，杭州，310012) 3(中国计量学院生命科学学院，杭州，310018) 摘 要 胶过滤，测定蛋白酶Hs08的分子质量为30．6ku，同时研究了酶专一性抑制剂对酶活性的影响。结果表明，蛋白 wRK、TNBs、Phenylgloxal 对酶活性影响实验结果表明，zn2+可使该酶活性明显提高，Cu2+对该酶活性有抑制作用。因此，该酶属于金属 反应速率Vmax下降50％，而对其米氏常数Km影响不大。 关键词高温蛋白酶，嗜热芽孢杆菌，化学修饰，活性中心，丝氨酸蛋白酶 蛋白酶是一种重要的工业化应用的酶制剂，占酶 1 材料与方法 制剂市场的65％以上【1J，已大量应用于食品、洗涤、 纺织、皮革、医药、化工等行业。而细菌来源的蛋白酶 1．1菌株及主要试剂 又是蛋白酶的重要来源之一，如在洗涤行业中，细菌 嗜热芽孢杆菌菌株HS，由本实验室从新疆火山 蛋白酶占到总微生物蛋白酶生产量的35％L2J。蛋白 口土壤中分离筛选得到。PMSF(苯甲酰基磺酰氟)、 酶按其作用的pH分为酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和中 hydrate、 性蛋白酶。近年来对酸性蛋白酶、碱性蛋白酶，特别 是一些高产菌株产碱性蛋白酶的研究已十分广 泛怛。J，也进行了工业化应用，尤其是在洗涤剂行 BSA(牛血清白蛋白)、酪蛋白为生化纯试剂，其他均 业。由于通常条件下微生物产生的蛋白酶不耐热，因 为分析纯试剂。 而限制了其应用于高温行业，如高温洗涤、高温纺织 1．2培养基及培养条件 加工、食品高温蒸煮、高温发酵以防杂菌污染等，因此 mL 将活化好的菌株挑取1环接种于装有150 研究高温蛋白酶很有必要。近年来发现，来自于耐高 r／min 种子培养基的500mL摇瓶中，置于46℃、200 温的微生物所产生的蛋白酶具有较高的耐热性与热 摇床上培养16h。培养基组成为：玉米粉2g／100 稳定性，其中人们研究最多的是耐高温碱性蛋白 mL，豆饼粉1 g／100mL， g／100mL，Na2HP0§0．4 酶№，7|。大部分中性蛋白酶由于其作用条件温和，虽 0．02 0．02 MgS04g／100mL，ZnS04g／100mL，CaCl2 也被应用于食品、洗涤、毛纺、丝纺、制药、化妆品、皮 0．02 mL。 g／100 革加工等行业，但因其热稳定性相对较差，生产与使 1．3蛋白酶的分离纯化 用条件复杂，因而限制了其应用。文中报道了以分离 取培养16h的发酵液，4℃下离心(14