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cho细胞表达系统的应用与研究
CHO细胞表达系统的应用与研究进展
刘畅
国药集团长春生物制品研究所
生物技术研究室
2009/11
长生研
主 要 内 容
CHO细胞表达系统的优势与国内外应用情况
CHO细胞的工程化
构建CHO细胞表达平台的意义和流程
简介基因重组生物技术产品的表达系统及应用
长生研
基因重组生物技术产品的表达系统
大肠杆菌表达系统
酵母表达系统
哺乳动物细胞表达系统
分子量较小、结构相对简单的蛋白质
分子量较大、结构较复杂、较少糖基化的蛋白质
结构复杂或糖基化对于活性非常重要的蛋白质
长生研
大肠杆菌表达系统的应用
大肠杆菌表达的生物技术药物有 20 种,分别是甲状旁腺激素、利尿钠肽、胰岛素及其两种突变体、生长激素、干扰素、和,G-CSF、白介素-1Ra、白介素-2、白介素-11、rPA、白喉毒素-IL 2融合蛋白、OspA脂蛋白等。这些产品都是结构相对简单、分子量较小的蛋白质,主要为细胞因子类药物。
这 20 种产品中,有 16 种为2000年以前批准上市的,说明了E coli.表达系统的应用空间已经越来越小。
长生研
酵母表达系统的应用
酵母表达的生物技术药物有 8 种,分别是尿酸水解酶、胰高血糖素、GM-CSF、血小板衍生生长因子(rhPDGF-BB)、乙肝疫苗(小S)、胰岛素Novolin及其突变体NovoLog、水蛭素等。
酵母表达的蛋白相对 E coli.表达系统分子量较大、结构较复杂。不过,虽然酵母表达系统表达的蛋白有糖基化修饰,但是糖链结构和组成与天然糖蛋白相差甚远,对于糖链极大影响生物活性的蛋白质如 EPO 、治疗性抗体等,仍无法用酵母表达系统表达。
长生研
哺乳动物细胞表达系统的应用
长生研
CHO细胞表达系统的优势与国内外应用情况
国内CHO细胞表达的不足之处
国内CHO细胞表达系统的应用情况
FDA批准的CHO细胞表达的生物技术药物
CHO细胞的五大应用优势
提高CHO细胞产量的策略
长生研
生产用哺乳动物细胞株
CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞):上皮样细胞。当前被用来表达tPA、EPO、单抗、VШ因子等重组蛋白。
BHK细胞(仓鼠胚肾细胞):成纤维样细胞。过去用于增殖病毒,并制作疫苗。现在也用于工程细胞构建。表达产物主要是VШ因子。
NSO细胞(小鼠胸腺瘤细胞):转化的淋巴细胞。主要表达用于单抗。
不同宿主细胞表达的重组蛋白其稳定性和蛋白糖基化类型不同,需根据要表达的目的蛋白选择最佳的宿主细胞。
长生研
CHO细胞的五大应用优势
长生研
产品
商品名
公司
首次批
准时间
适应证
激素
follitropin beta,促滤泡素-
Follistim
Akzo Nobel
1997.9
不孕症
follitropin alfa,促滤泡素-
Gonal-F
Serono S.A.
1998.9
不孕症
thyrotropin alfa,促甲状腺素
Thyrogen
Genzyme
1998.12
血清甲状腺球蛋白测试
酶
alteplase, tPA
Activase
Genentech
1987.11
急性心梗;肺栓塞,急性脑中风
Laronidase,粘多糖--L-艾杜糖醛酸水解酶
Aldurazyme
Genzyme
2003.4
粘多糖贮积病
Imiglucerase,葡糖脑苷脂酶
Cerezyme
Genzyme
1994.5
Gauchers病
Idursulfase
Elaprase
Shire Human Genetic Therapies
2006.7
艾杜糖硫酸酯酶缺乏症
Algasidase beta,半乳糖苷酶-
Fabrazyme
Genzyme
2003.4
Fabrys病
dornase alfa,DNA酶
Pulmozyme
Genentech
1993.12
囊性纤维化
Tenecteplase,t-PA突变体
TNKase
Genentech
2000.6
急性心梗
凝血因子
coagulation factor IX
BeneFix
Wyeth
1997.2
血友病B
antihemophilic factor VIII
Recombinate rAHF
Baxter Healthcare
1992.2
血友病A
Factor VIII(无B链)
ReFacto
Wyeth
2000.3
血友病A
细胞因子
Interferon -1a,
Avonex
Rebif
Biogen/ Idec
Serono S.A./ Pfizer
1996.5
2002.3
多发性硬皮病
darbepoetin alfa,EPO突变体
Aranesp
Amgen
2001.9
肾性贫血
epoietin alfa,EPO
Epogen
Pro
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