cho细胞表达系统的应用与研究.ppt

CHO细胞表达系统的应用与研究进展 刘畅 国药集团长春生物制品研究所 生物技术研究室 2009/11 长生研 主 要 内 容 CHO细胞表达系统的优势与国内外应用情况 CHO细胞的工程化 构建CHO细胞表达平台的意义和流程 简介基因重组生物技术产品的表达系统及应用 长生研 基因重组生物技术产品的表达系统 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 哺乳动物细胞表达系统 分子量较小、结构相对简单的蛋白质 分子量较大、结构较复杂、较少糖基化的蛋白质 结构复杂或糖基化对于活性非常重要的蛋白质 长生研 大肠杆菌表达系统的应用 大肠杆菌表达的生物技术药物有 20 种，分别是甲状旁腺激素、利尿钠肽、胰岛素及其两种突变体、生长激素、干扰素、和，G-CSF、白介素-1Ra、白介素-2、白介素-11、rPA、白喉毒素-IL 2融合蛋白、OspA脂蛋白等。这些产品都是结构相对简单、分子量较小的蛋白质，主要为细胞因子类药物。 这 20 种产品中，有 16 种为2000年以前批准上市的，说明了E coli.表达系统的应用空间已经越来越小。 长生研 酵母表达系统的应用 酵母表达的生物技术药物有 8 种，分别是尿酸水解酶、胰高血糖素、GM-CSF、血小板衍生生长因子(rhPDGF-BB)、乙肝疫苗(小S)、胰岛素Novolin及其突变体NovoLog、水蛭素等。 酵母表达的蛋白相对 E coli.表达系统分子量较大、结构较复杂。不过，虽然酵母表达系统表达的蛋白有糖基化修饰，但是糖链结构和组成与天然糖蛋白相差甚远，对于糖链极大影响生物活性的蛋白质如 EPO 、治疗性抗体等，仍无法用酵母表达系统表达。 长生研 哺乳动物细胞表达系统的应用 长生研 CHO细胞表达系统的优势与国内外应用情况 国内CHO细胞表达的不足之处 国内CHO细胞表达系统的应用情况 FDA批准的CHO细胞表达的生物技术药物 CHO细胞的五大应用优势 提高CHO细胞产量的策略 长生研 生产用哺乳动物细胞株 CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）：上皮样细胞。当前被用来表达tPA、EPO、单抗、VШ因子等重组蛋白。 BHK细胞（仓鼠胚肾细胞）：成纤维样细胞。过去用于增殖病毒，并制作疫苗。现在也用于工程细胞构建。表达产物主要是VШ因子。 NSO细胞（小鼠胸腺瘤细胞）：转化的淋巴细胞。主要表达用于单抗。 不同宿主细胞表达的重组蛋白其稳定性和蛋白糖基化类型不同，需根据要表达的目的蛋白选择最佳的宿主细胞。 长生研 CHO细胞的五大应用优势 长生研 产品 商品名 公司 首次批 准时间 适应证 激素 follitropin beta，促滤泡素- Follistim Akzo Nobel 1997.9 不孕症 follitropin alfa，促滤泡素- Gonal-F Serono S.A. 1998.9 不孕症 thyrotropin alfa，促甲状腺素 Thyrogen Genzyme 1998.12 血清甲状腺球蛋白测试 酶 alteplase, tPA Activase Genentech 1987.11 急性心梗；肺栓塞，急性脑中风 Laronidase，粘多糖--L-艾杜糖醛酸水解酶 Aldurazyme Genzyme 2003.4 粘多糖贮积病 Imiglucerase，葡糖脑苷脂酶 Cerezyme Genzyme 1994.5 Gauchers病 Idursulfase Elaprase Shire Human Genetic Therapies 2006.7 艾杜糖硫酸酯酶缺乏症 Algasidase beta，半乳糖苷酶- Fabrazyme Genzyme 2003.4 Fabrys病 dornase alfa，DNA酶 Pulmozyme Genentech 1993.12 囊性纤维化 Tenecteplase，t-PA突变体 TNKase Genentech 2000.6 急性心梗 凝血因子 coagulation factor IX BeneFix Wyeth 1997.2 血友病B antihemophilic factor VIII Recombinate rAHF Baxter Healthcare 1992.2 血友病A Factor VIII（无B链） ReFacto Wyeth 2000.3 血友病A 细胞因子 Interferon -1a， Avonex Rebif Biogen/ Idec Serono S.A./ Pfizer 1996.5 2002.3 多发性硬皮病 darbepoetin alfa，EPO突变体 Aranesp Amgen 2001.9 肾性贫血 epoietin alfa，EPO Epogen Pro