总大肠菌群革兰氏染色的关键控制点分析.docxVIP

2014年1月AcademicPeriodicalofFarmProductsProcessingJan.文章编号：1671-9646（2014）01b-0064-03总大肠菌群革兰氏染色的关键控制点分析颜松（福清市质量计量检测所，福建福清350300）摘要：以革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌标准菌株为对照，以大肠杆菌标准菌株为总大肠菌群的代表菌，通过大量的染色试验，初步探讨菌种菌龄、涂菌状态、碘液媒染时间和酒精脱色时间4个关键控制点对水质检验中总大肠菌群 革兰氏染色效果的影响，结果表明菌种菌龄22~26h，涂菌状态用接种环边缘挑取少量典型菌分散涂布，碘液媒染时间20~60s，酒精脱色时间30~50s为最优方案。关键词：总大肠菌群；革兰氏染色；关键控制点中图分类号：Q93-333文献标志码：Adoi：10.3969/jissn.1671-9646（X）.2014.01.051CriticalControlPointAnalysisonGramStainingofTotalColiformsYANSong（FuqingTestingInstituteofQualityandMeasurement，Fuqing，Fujian350300，China）Abstract：TheGram-positivebacteriumstandardstrainofStaphylococcusaureusisusedasthecomparisonandthestandardstrainofE.coliisusedastherepresentativebacteriaofthetotalcoliforminthispaper.Throughalargenumberofthestainingtests，theinfluencesofthebacteriastrainage，thecoatingmodeofthebacteria，theiodinesolutionmordantagenttimeandthealcohol-decolorizationtimeasthefourcriticalcontrolpointsontheresultoftotalcoliformsGramstainingonwaterqualitytestingareinvestigatedpreliminarily.TheresultsshowthattheexcellentGramstainingprogramisasfollows：thebacteriastrainageshouldbebetween22and26hours.Thecoatingmodeofthebacteriashouldbeasmallamountofscatteredtypicalbacteriaattheedgeoftheinoculatingloop.Theiodinesolutionmordantagenttimeshouldbebetween20and60secondsandthealcohol-decolorizationtimeshouldbebetween30and50seconds.Keywords：totalcoliforms；Gramstaining；criticalcontrolpoint0引言总大肠菌群是指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌[1]。在日常生活饮用水监测的微生物指标当中，总大肠菌群是一项鉴定水源是否受到粪便污染的重要指标。按照现行生活饮用水标准检验方法中微生物指标检验的相关规定，在对水源总大肠菌群检验的全过程中，在伊红美蓝琼脂平板上分离得到的典型总大肠菌群菌落上挑菌进行革兰氏染色鉴定是其中最关键的一个检验步骤，该染色步骤进行的是否正确，染色结果是否顺利将严重影响到总大肠菌群的检出情况，直接影响最终检验结果的正确性。 革兰氏染色法是细菌学中一个重要的鉴别染色法[2]。 在常规的细菌形态学研究和细菌鉴定过程中，革兰氏染色往往是后续生化试验和分子生物学鉴定的基础。经过革兰氏染色后，可以把所有的细菌划分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类[3]。在革兰氏染色操作中有很多值得注意的关键控制点，这些细节上的控制点决定着染色的成败，其中大肠杆菌是大肠菌群中很重要也很有代表性的一种[4]，因此以大肠杆菌标准菌株为代表菌对总大肠菌群革兰氏染色关键控制点进行分析研究，对于提高检验结果的准确性具有一定的参考意义。1材料与方法1.1试验材料1.1.1供试菌种选取新培养到相应阶段的革兰氏阴性菌大肠埃希氏菌（即大肠杆菌）标准菌株ATCC8739TM为 总大肠菌群典型代表菌株，同时以革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC6538TM作为其对照菌株。1.1