干细胞治疗心律失常应用、问题与展望.pptVIP

干细胞在心律失常的应用 构建生物起搏器 SSS AVB 重建房室传导通路 AVB 一、电子起搏器的不足 诸多并发症 感染 出血 心肌穿孔 起搏器功能障碍 电池耗竭需定期更换 右心室心尖起搏，不符合生理，可引起心功能恶化 心理负担：儿童和青少年 动物实验① Edelberg等在 1998年把人的β2受体基因转染到大鼠的心脏，使其过度表达，结果大鼠的心率增加了 40％ 动物实验② Edelberg等在 2001年把人的β2受体基因质粒注射到猪的右心房，48小时后出现心房节律，此节律心率增加了 50％ 意义 使心室肌或心房肌细胞的逸搏频率增快 可治疗窦房结病变或房室传导阻滞 本实验结论 降低静息电位，可使内向电流启动而触发起搏 抑制Ik1可使心室肌细胞转换为起搏细胞 细胞内定位转染Kir2.1AAA能够建立生物起搏点，以达到治疗目的 此技术存在的问题：可产生局灶异位自发节律，与心室节律竞争 动物实验① Qu等在 2003年把包含HCN2的腺病毒注射到犬左房内 动物实验② Plotnikov等( 2004年)导管法将HCN2腺病毒颗粒注射到犬左束支内 细胞移植 动物实验① Ruhparwar 将胎犬心房肌细胞（包含窦房结）移植到成年犬的左心室游离壁 移植细胞成为受体心脏新的起搏点 供体细胞和受体细胞之问建立间隙连接 起搏点对异丙肾上腺素起反应 采用酶消化法分离新生约克夏猪右心房组织(包括窦房结) 制备成5×l0 个／mL心肌细胞悬液 开胸直视下将l mL悬液注入幼年猪左心室游离壁 移植细胞均成活，并与周围心肌发生电、化学连接，主导心室节律 对异丙肾上腺素发生反应 男性人胚胎心房肌细胞(窦房结细胞)移植到雌性猪左室壁 细胞移植后动物心室率较未进行细胞移植的快 电生理表明心室节律起自细胞移植区： PCR检测证实细胞移植区出现SRY基因 在移植细胞与宿主细胞之间出现了连接蛋白43 异体细胞移植存在的问题 ①有异体排斥反应； ② 移植的胚胎体细胞对异体移植部位的微环境适应性差； ③供体细胞来源困难 动物实验① Satin等研究人ESC分化的心肌细胞，其药理敏感性和离子通道特性，发现该细胞具有自发的起搏兴奋特性，可作为心脏起搏细胞 动物实验? Kehat用人ESC在体外培养出心肌细胞移植物，与体外培养的大鼠心肌细胞之间建立了电-机械联系 用猪建立了一个完全型房室传导阻滞模型 将培养的心肌细胞移植入受体心脏，可观察到受体和供体的电一机械融合 移植细胞能成功使心室节律性起搏 动物实验? Xue等 将人胚胎干细胞修饰为起搏细胞 在体外使静止的心室肌细胞产生节律性的电一收缩活动 B肾上腺素、利多卡因等药物能调控其跳动速度 将这些细胞注射到豚鼠左室前壁，即能驱动心室搏动，形成起搏点 优势 胚胎干细胞为全能干细胞，具有建系传代、全能分化、干细胞永生化、增殖能力强等方面优势 问题 一、胚胎干细胞具有向终末细胞分化的特性，而分化为终末细胞则失去起搏特性。因此精确控制干细胞分化并终止于窦房结细胞阶段是一个绝技 二、尚不清楚具备起搏功能的胚胎干细胞，是否具有人类心脏起搏细胞同样的离子通道 限制 社会伦理问题 胚胎干细胞具有致心律失常源性 胚胎干细胞具有免疫源性 致肿瘤性 优点 间叶干细胞容易分离培养 多系分化增殖 无免疫排斥 不存在伦理问题 易于分化诱导为自律细胞 实验理论基础 间叶干细胞具备起搏潜能（电生理实验） 干细胞间高度表达特异性缝隙连接蛋白Cx40和Cx43 细胞电生理和染料传递（dye-transfer）实验表明干细胞之间、干细胞与心肌细胞之间存在偶联(couple)现象 动物实验表明，干细胞之间、干细胞与宿主心肌细胞之间建立Cx43缝隙连接(gap junction) 结论 移植骨髓细胞在体内可分化为典型的心肌细胞与血管内皮细胞 移植骨髓细胞可与宿主细胞建立缝隙连接 移植细胞可替代损伤的窦房结发挥自律起搏功能 可建立生物起搏器 实验 1－起搏电流 将骨髓干细胞转染HCN和荧光标志GFP，并测量其起搏电流 铯能够封闭该通道 符合起搏电流If的特性 实验 2－体外模型 将装载GFP＋HCN2基因干细胞以点状种植于载玻片上 其周围种植新生大鼠心室肌细胞 建立以干细胞为中心，心肌细胞在周围的类似窦房结样结构 在装载HCN2干细胞周围的心肌细胞，其自发搏动节率明显快于对照组的节率 实验 3－体内模型 将装载起搏基因的间叶干细胞直接点状注射到犬左室心外膜 注射装载HCN2+GFP干细胞的犬有自发心室节律，频率大约60bpm，起搏点位于注射部位 在注射点可检测到装载荧光标志GFP的成人间叶干细胞 证实移植干细胞之间、干细胞与宿主心肌细胞之间形成了缝隙连接 实验一 干细胞移植治疗房室传导阻滞 Xiaoqing Ren, et al. Ca