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31 等电聚焦电泳（IEF）— 是指电泳系统中加入两性电解质载体，当通以直流电时，两性电解质载体即形成一个由阳极到阴极连续增高的pH梯度。样品（蛋白质等）进入时，不同的蛋白质移动到与其等电点相当的pH位置上，从而使不同等电点的蛋白质得以分离。 — + + - pH=pI pI1 pI2 pI3 pIn a b c 没通电时的变化 引入电场时的变化 电泳结束后的变化 （四）双向电泳 双向电泳（two - dimensional electrophoresis，2-DE）——广义定义是将样品进行电泳后针对不同目的在它的直角方向再进行一次电泳。目前双向电泳大多是指第一向为等电聚焦，第二向为SDS电泳。 32 33 带电的胶粒或大分子在外加电场中，向带相反电荷的电极作定向移动的现象称为电泳。生物分子都带电荷，其电荷的多少取决于分子性质及其所在介质的pH及其组成。由于混合物中各组分所带电荷性质、电荷数量以及分子量的不同，在同一电场的作用下，各组分泳动的方向和速度也各异。因此，在一定时间内各组分移动的距离不同，从而达到分离鉴定各组分的目的。 在溶液中，许多分子都可以形成正负离子。由于电荷、质量等差异，会有不同的质/荷比，使其在电场中具有不同的迁移速度。悬浮或溶解在电解质溶液中的带电粒子，在电场作用下以不同的速度向着与自身所带电荷极性相反的电极移动。在电泳过程中，带正电荷的粒子向电场的负极方向移动，带负电荷的粒子向电场的正极方向移动。移动的带电粒子受到电场力和周围介质阻力的作用，当二力平衡时，粒子以稳定的速度向电极方向移动。 若容夜里一电量为q的带电粒子，在场强为E的电场中以速度v移动，则它所受到的电场力为F= Eq 。 根据斯托克司定律，在液体中泳动的球状粒子所受到的阻力为F’=6?r?v。 Stokes’law斯托克斯定律 预测圆球在粘性介质中运动的摩擦力F的定律。根据这一定律，F=6πrηv，式中r为球半径，v为速度，η为介质的粘度。球加速直至到达一稳定终速为止。对于下落的球，F等于作用于球的重力。该定律由乔治·斯托克(1819—1903年)发现。 若二力平衡，即F = F’时，粒子做匀速泳动，且有v = E q/6?r? 。显然粒子移动速度不仅与本身性质有关，还受到其他外界因素的影响。 电场强度是在电场方向上单位长度的电势降落，也叫电势梯度。 带电粒子在电场中移动的速度与所加的电压有关。按照电压的大小，可以将电泳分为常压和高压电泳。电场强度愈高，带电粒子受到的电场力就愈大，粒子移动速度愈快。常压电泳分离时间较长，数小时到数天，常压电泳多用于分离大分子物质，而高压电泳多用于分离小分子物质。高压电泳分离时间短，有时只需要十几分钟或几十分钟就可以完成电泳过程。 缓冲液的浓度可用摩尔或离子强度表示.离子强度低,电泳速度快,分离区带不易清晰,如果过低,缓冲液的缓冲量小,难以维持pH值的恒定;离子强度高,电泳速度慢,但区带分离清晰,如果过高,除了使得电泳速度过慢,还会因为离子强度增加使电泳时的电流变大,增加热量的产生,引起温度改变,对电泳不利。一般0.02~0.2M之间。 对于某一蛋白质而言，当溶液的酸碱度处于某一特定pH值时，它将带有相同数量的正、负电荷（即净电荷为0），致使蛋白质分子在电场中不会移动，故此特定的pH称为该蛋白质的等电点。结构不同的蛋白质，其等电点有着显著地差别。在溶液相对于等电点是酸性的溶液中， COO-和H-结合成难离解得COOH，而留下的NH3+使蛋白质带正电，在电场中向负极方向移动；反之在溶液相对于等电点呈碱性的溶液中，蛋白质带负电而向电场的正极方向移动。溶液pH值离等电点愈远，粒子所带净电荷愈多，粒子迁移速度就越快；反之越慢。因而，选择溶液的pH值时，以尽量扩大各种蛋白质所带电荷量的差异为前提，这样有利于提高蛋白质的分离分析。为了使溶液的pH值在电泳过程中保持稳定，必须使用缓冲液。 许多固体表面都带有多余（额外）的负电荷，溶液中的正离子吸附至固体表面形成双电子层，当在液体两端施加了电压时，就会发生液体相对于固体表面的移动，这一现象称为电渗，电渗中液体的整体流动叫电渗流。一般好像和电泳方向相反。电渗流指溶液在外加电场的作用下整体朝一个方向运动的现象。 例如，在纸电泳中，由于滤纸（纤维素）上带有一定量的负电荷，而使与纸相接触的水溶液带上正电荷，液体便向负极移动并带动粒子向负极移动。若粒子本来向负极移动，则其表观速度将比泳动速度快；若粒子原来向正极移动，则其表观速度比泳动速度慢。有时，本来不带电荷的物质也会向负极移动。在电场作用下液体(通常是水)相对于和它接触的固定的固体相作相对运动的现象。 1809年俄国物理学家Рейсе 首次发现电泳现象。他在湿粘土中插上带玻璃管的正负两个电极，加电压后