DNA分型技术原理.ppt

DNA分型技术原理 背 景 DNA指纹或DNA分型是英国遗传学家Alec Jeffreys在1985年首次提出的。 Jeffreys博士发现DNA的某些区域具有重复序列，并且序列重复的数目存在个体差异，通过开发检测这些DNA重复序列长度变化的技术，开创了个体身份识别的新局面。 DNA长度多态性的分类 长度多态性： 等位基因片段长度的个体差别。由一特定序列，首尾相连串联重复次数不同产生的个体差别。 分为： 可变数目串联重复（variable number of tandem repeat, VNTR） 短串联重复(short tandem repeat, STR) VNTR和STR的区别及命名 A：产生原因：DNA滑动与同源染色体不等交换。 B： 差别： STR VNTR 重复序列组成 2-7 bp 7-数十bp 重复序列数目 2-10数个 10数个-数百个 鉴别能力 高 极高 优势扩增现象 不明显 极明显 检测灵敏度 极高 稍差 片段总长度 200-500 bp 数千以上bp C：STR的命名： 非编码区-D3S1358 D3 第三号染色体 S 单拷贝（single copy） 1358?? VNTR序列的发现序号 STR分型 STR，short tandem repeat,短串联重复序列，微卫星（microsatellite），SSR (simple sequence repeat) 结构特征：序列重复，分为简单重复（simple）和复杂重复（complex） 分布于基因之间 STR基因座命名原则 STR是重复单位长度为2-6核苷酸的重复DNA序列 Dinucleotide (CA)(CA)(CA)(CA) Trinucleotide (GCC)(GCC)(GCC) Tetranucleotide (AATG)(AATG)(AATG) Pentanucleotide (AGAAA)(AGAAA) Hexanucleotide (AGTACA)(AGTACA) STR在人类基因组中分布广泛 HGP带来更多STR认识 目前被鉴定出的4核苷酸重复超过20，000个(Collins et al. An exhaustive DNA micro-satellite map of the human genome using high performance computing. Genomics 2003;82:10-19) 整个基因组中STR数量可能超过100万！ (Ellegren H. Microsatellites: simple sequences with complex evolution. Nature Rev Genet 2004;5:435-445). STR占整个人类基因组序列的3％ (Lander et al. Initial sequencing and analysis of the human genome. Nature 2001;409:860-921). DNA分型的步骤 一、DNA提取 应用聚合酶链反应（PCR）技术测定临床标本中的病原体核酸成分，是一种高度敏感，且最为直接的检测手段。由于临床标本中含有蛋白质、脂类等物质，可干扰PCR反应，故在做PCR反应前必须进行核酸提取。 临床常见的标本有血清（浆）、全血、分泌物、棉拭子、脓液、体液、新鲜组织、石蜡切片等，这些临床标本的处理和保存方法各有不同。 核心与关键 脑肺肌肉肾 6pg/细胞 一、理想DNA样品的要求 1.?? 纯度-RNA、蛋白