遗传学实验六 x-染色质的制片与观察.pptVIP

1）通过实验了解形成X-染色质的原理,及其 在临床诊断上的应用。 2）掌握人类X-染色质的制片及观察方法。 3) 在显微镜下正确识别Barr氏小体的特征 及其所在的位置。 二.实验原理 早在1949年Barr等人发现雌猫的神经细胞间期核中有一个染色很深的染色质小体，而雄猫没有。后来在大部分正常女性表皮口腔颊膜，羊水等许多组织的间期核中也找到一个特征性的、浓缩的染色质小体，男性则无。 由于这种染色质小体与性别及X染色体数目有关，所以称为巴氏小体或性染色质体。 巴氏小体（Barr body） 在果蝇和哺乳动物中，X染色体上的基因在纯合的雌性细胞中有相同的两份，雄性中只有一份。可是雌雄在表型上却看不出任何显著的差别，这种现象的遗传机制是由于存在一种剂量补偿效应。 剂量补偿效应：是指在XY性别决定机制的生物中，使性连锁基因在雌雄性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。 M.F.Lyon提出了阐明哺乳动物剂量补偿效应和形成Barr body的X染色体失活的假说（Lyon hypothesis）其主要内容是： 1、正常雌性哺乳动物的体细胞中，两条X染色体中只有一条X染色体在遗传上有活性,另一条在遗传上无活性。其结果使X连锁基因得到剂量补偿，保证染色体为XX的雌性和XY的雄性具有相同的有效基因产物。 2、X染色体失活是随机的。 在同一哺乳动物的体细胞中，有些细胞里父源的X染色体失活；另一些细胞里，母源的X染色体失活。 3、失活发生在胚胎发育早期。 例如人类，在胚胎发育第16天时（合子细胞增殖到5--6千个细胞时）发生失活。某一个细胞的一条X染色体一旦失活，这个细胞的所有后代细胞中的该X染色体均处于失活状态。 此外，细胞学的研究发现Barr小体的数目正好是X染色体数目减1。 设X染色体数为n，则巴氏小体数目＝n-1，XXX的个体则具2个巴氏小体。 实验材料:人体口腔粘膜或毛发根部细胞。 实验试剂:50%冰醋酸、改良碱性品红染色液或醋酸地衣红染色液。 实验器材用具:显微镜、牙签、盖片、 玻片、镊子、滤纸、 1.口腔颊部粘膜细胞巴氏小体观察： 取材：漱口2－3次，用牙签钝面刮取颊部粘膜上皮细胞。 涂片:将牙签上的细胞平铺涂在载片上，晾干1－2分钟。 染色: 加上1滴碱性品红染色液，染色2－5分钟。 镜检： 加上盖片，用滤纸吸去多余的染色液，镜检观察。 2．发根细胞巴氏小体观察： 拔取带毛囊头发一段→50%冰醋酸解离5分钟→剥取毛囊→水洗干净→染色2-5分钟→压片→镜检。 观察在女性间期细胞核内侧靠近核膜处有约1um大小的染色较深的颗粒状点，即为巴氏小体。巴氏小体的形状有椭圆形,圆形,哑铃形,三角形。 1.分别观察女性的30－50个细胞，计算显示X染色质所占百分比。 2.观察中选绘1个具有巴氏小体的细胞，标明细胞各组成结构。 3.巴氏小体分析技术在人类遗传学工作中有何用途? 4.什么是剂量补偿效应? 涂片时要注意将牙签上的细胞均匀的平铺于载玻片上，避免细胞重叠，不利于观察。 如用到醋酸解离液，需水洗干净后，再用改良品红染色,染色的时间不能太长，2－5分钟便可。 用醋酸地衣红染色时间可以长些。 用过的牙签请丢弃在垃圾桶中，不要随手乱扔，以免造成污染。 * * 实验六x-染色质的制片与观察 一、实验目的 正常雌性的体细胞间期核里有一个染色较深的点，而雄性没有。 正常男性上皮细胞 正常女性上皮细胞 巴氏小体 XIC区上的一个基因。 X染色体失活的机理 位于X染色体长臂上的一个区域。 只有失活的X染色体上的XIC表达。 为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来? 因为失活的X染色体已经异染色质化,成为功 能性异染色质。它是在S期末开始复制的， 是一种浓缩的、惰性的异染色质化的小体。 三.实验材料与器材、试剂 四.实验步骤 为什么要漱口？ 为什么染色时间不能太久？ 吸去染色液时应该注意什么？ 酸解后为什么要水洗？ 毛囊 毛发 六.实验报告 七.注意事项 *