磷脂酶d高产菌株的原生质体紫外诱变选育-生物加工过程.pdfVIP

第 １４卷第２期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１４ Ｎｏ２ ２０１６年３月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｍａｒ２０１６ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１６０２００５ 磷脂酶Ｄ 高产菌株的原生质体紫外诱变选育 杨兰兰，张小里，封娟娟，朱南南，赵彬侠 （西北大学 化工学院，陕西 西安 ７１００６９） 摘　 要：为了获得磷脂酶Ｄ 高产菌株，由链霉菌野生菌株ＬＤ０５０１ 出发研究原生质体的制备和再生条件，建立原生 质体紫外诱变筛选方案。 采用酶解法制备原生质体，用紫外线对原生质体诱变，ＴＬＣ检测突变株产磷脂酶Ｄ活力。 原生质体的适宜条件：种子培养基中甘氨酸质量浓度５ ｇ／ Ｌ，菌龄７２ ｈ，用３ ｍｇ／ ｍＬ 的溶菌酶在３０ ℃下酶解７５ ｍｉｎ。 通过原生质体诱变筛选，得到１株高产菌株，磷脂酶Ｄ水解活力达４２９ Ｕ／ ｍＬ，提高幅度为１８０４％。 该方法 有效改善了链霉菌野生菌株原生质体的制备效果，紫外诱变筛选显著提高了磷脂酶Ｄ 的活力，高产突变株具有较 好的稳定性。 关键词：磷脂酶Ｄ；原生质体；紫外诱变；筛选 － － － 中图分类号：Ｑ９３　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１６）０２ ００２２ ０５ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｈｉｇｈ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ｄ⁃ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＵＶ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ＹＡＮＧ Ｌａｎｌａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏｌｉ，ＦＥＮＧＪｕａｎｊｕａｎ，ＺＨＵ Ｎａｎｎａｎ，ＺＨＡＯ Ｂｉｎｘｉａ （Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ′ａｎ７１００６９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｃｒｅｅｎ ａ ｈｉｇｈ⁃ｙｉｅｌｄｉｎｇ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ｄ ｓｔｒａｉｎ ｆｒｏｍ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． ＬＤ０５０１，ｗｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒ ｉｔｓｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ′ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｍｕｔａｇｅｎｉｚｅｄｉｔｓｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓｂｙ ＵＶ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｓｗｅｌｌ．Ｔｈｅｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｂｙ ｅｎｚｙｍｅａｎｄｍｕｔａｇｅｎｉｚｅｄｗｉｔｈ ＵＶｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＴＬＣ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｈｅ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ＬＤ０５０１ ｗａｓ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｉｎｔｏ ｍｙｃｅｌｉａ ｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈ ０５％ ｇｌｙｃｉｎｅ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｏｒ ７２ｈＴｈｅｍｙｃｅｌｉａｗｅｒｅｐｒｏｃｅｓｓｅｄｗｉｔｈ３ｍｇ／ ｍＬｌｙｓｏｚｙｍｅａｔ３０ ℃ ｆｏｒ７５ｍｉｎ．Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓｏｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． ＬＤ０５０１ ｗｅｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＵＶ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ａ ｈｉｇｈ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ｄ⁃ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ，ｗｈｏｓｅ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ｄ′ｓ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅａｃｈｅｄ ４２９ Ｕ／ ｍＬ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｂｙ １８０４％