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蛋白表达解决方案
;主要内容
1,成功案例分享
2,蛋白表达客户工作流程及存在的问题
3,AJ 解决方案
;德国耶拿公司—Western Blot 整体解决方案;Western 流程;5;6;7;原因;UVP Chemstudio系列超敏化学发光成像;数据可追溯
;如何选择合适的western blot检测方法?;斯隆-凯瑟琳癌症中心主任Ushma S. Neill在担任 “临床调查研究杂志”评审期间曾连续拒绝了四篇本已接受并准备发表的来稿后明确指出,所有提交的western数据的建立必须是平等的,其中包括:
所采用的检测方法定量范围是否可靠?
实验者如何确定化学发光的曝光时间?
是否有内参?内参是否可靠?
分析结果是否使用的是原始数据
原始数据是否被人修改
;电泳胶和印迹
“For quantitative comparisons, appropriate reagents, controls and imaging methods with linear signal ranges should be used.”
“对于定量比较实验,应该使用适当的试剂、参比及线性范围内的成像方法。”
--- Nature
;Western Blot Workflow-Detection;化学发光检测的优势;Chemiluminescence-Western Blot;Chemiluminescence-Western Blot;为什么 CCD技术优于底片成像?; 成像方式;CCD具有更宽的动力学线性范围(4.0 个数量级)
底片的动力学线性范围低(1.5 ~ 1.9 个数量级)
CCD可进行更精确的浓度比较
CCD无需多次曝光
CCD系统 可提示过饱和反应
过饱和像素警示
底片无法警示过饱和区域------数据失真
CCD 系统无需任何消耗品
无需底片及冲洗试剂
无需冲洗设备及暗室
降低了输出成本 (热敏打印 vs. 底片)
;化学发光 vs. X光片曝光 ;CCD成像与胶片法对比;化学发光成像的局限;24;多色荧光—多重检测;凝胶制备;磷酸化蛋白检测;近红外成像更适合western blot成像;29;Western 检测的方法; 化学发光(灵敏度)
+ 最优搭配 近红外多色荧光
(宽线性范围,多重检测,持久信号);UVP Chemstudio全能成像
;在体实时检测的解决办法—活体成像;动物成像;氙灯光源:
可以为成像系统提供从紫外到近红外的全光谱激发光,即可作为顶置光源,亦可作为透射光源,无限扩展了仪器的荧光成像应用。
氙灯光源提供更强的激发光,提高检测灵敏度。
应用举例:RGB/NIR多色荧光???像、2D DIGE、小动物活体成像和植物成像。;荧光光源介绍;滤光片的选择;AJ如何帮助客户如何提高实验效率?;快速半干转印
快速:15min-50min,湿转一般1.5h-过夜
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