植物线虫的基本研究方法.docVIP

第 章 植物线虫的基本研究方法 第一节 植物线虫的采集 一、植物线虫病害的症状 植物受到线虫危害后，可以表现各种症状，有的表现为瘿瘤、叶斑、坏死或整株枯死等，通常可以在病变部位找到病原线虫。但是多数植物线虫病害表现为变色、褪绿、黄化、矮缩和蔫萎等近状，这多半是根部受害造成的。大多数病原线虫不在地上部，往往在根部或根际的土壤中可以找到，这—种类型的线虫病，在施肥或采取其他措施以后，植株的长势可以暂时恢复，但不久又表现出原来的受害状，这类线虫病的危害性往往容易忽视。 植物的腐烂组织中，尤其是地下部分的器官，也常常发现有线虫，这就要注意区别是腐生线虫还是寄生线虫。腐生性线虫的主要特征是在水中十分活跃，口腔内没有口针，食道多为双胃型或小杆型．尾部很长，多为丝状，植物寄生线虫通常都有发达的口针，尾部较短、尖削或钝圆。 各种线虫的为害状不同，茎线虫（Ditylenchus）主要为害植物的地下茎，如块茎、鳞茎和块根等；胞囊线虫（Heterodera）多寄生在植物根部支根或须根的侧面，虫体裸露；根结线虫（Meloidogyme）常在新生的支根或侧根上寄生后引起根结，虫体在瘤状组织中；粒线虫（aguina）和滑刃线虫（Aphelenchoides）主要为害植物的地上部分，虫体则常在茎杆的生长点或穗部，可以传染植物病毒的长针线虫 、（Longidorus）剑线虫（Xiphinema）和毛刺线虫（Trichodorus）等，在根部外寄生，在土中十分活跃，虫体较大，而且都有发达的口针；伞滑刃线虫（Bursapheleuchus）中的松材线虫则土要为害松材枝干的木质部。 二．标本的采集 线虫的田间取样是线虫学研究工作的基础。如果想了解田间线虫的种类、分布和为害情况，首先要进行田间取样。田间取样在整个线虫学研究中占有十分重要的地位，例如，我们想估计田间的线虫群体情况．但如果取样方法不当，取样没有代表性或取样过程中有其他错误，则无论实验里的分离鉴定手段多么先进、投入的时间多久长，也不会得出正确的结论。线虫取样方法有许多不同的类型，按线虫的载体来分有植物组织内线虫的取样、土壤内线虫取样以及昆虫寄生线虫取样；按取样目的来分，有病害诊断取样、线虫分类取样、线虫病害普查取样、线虫田间种群消长取样和田间杀线虫剂药效试验定量取样等。不同类型的取样方法对取样内容都有具体的要求，但总的规则是相同的。首先根据取样目的及线虫的可能分布情况，制定取样计划，确定取样方法，然后进行标样的采集。 1.病变组织的采集 植物受线虫为害后，发生明显病变的部位，往往也是病原线存在的部位；例如，小麦粒线虫（Anguia tritici）在籽粒虫瘿中，水稻干尖线虫A．besseyi在穗部籽粒颖壳的内侧，根结线虫和胞囊线虫等都在根部，茎线虫则多在地下茎部。只要采集病变的组织器官，就能得到病原线虫。 因此，土样的采集最好是用特殊的采样器，有的是半筒状的，长 2030 cm，宽 2025cm 2 病根、根际土壤和大田土样的采集 对于在根部内寄生的线虫，采取根样是很重要的。对于在根部外营寄生生活的线虫则土样尤为重要。由于线虫世代的交替与重叠，内寄生线虫也有一段时期生活在土壤中，外寄生线虫在某一时期则在根部取食、寄生，因此取样时应把根系和根际土壤一起来集。有时采集土样的目的只是了解某种线虫在该地区田块中的分布和虫量情况。绝大多数线虫分布在耕作层中，所以都是在 020cm 的土层中采集土样。采集土样最好在湿润的土壤中采。过于干燥和潮湿的土壤，其中线虫存活率低。 样本的大小和数目，要考虑人力和设备条件。线虫在土中移动的距离是很有限的，在田间总是成团或成块状分布，所以，宁可在多点采较多样本，不要只从田边取样。每点样本的量少一些，而不要在少数几点上挖取大量土样。取土的量视需要而定，作虫口密度调查时要多一些，一般每块田挖取土样 0.51kg，分多点采集。植株样本较小的，可连同根和根际土壤一起采集，植株大则只取一部分受害部或根系和土壤。 3 样本的保存 采集到的标本或土样要防止干燥．写好标签后随即放在聚乙烯薄膜袋中。不要用有色的或有气味的薄膜口袋，袋口要用橡皮筋扎紧。根系或土样本放在冰箱中4℃可保存一定时期而不致损坏，一般都在 510℃温度下贮存。贮藏最适宜的温度对各种线虫是不同的．在 520℃之间，但 13℃时多数线虫都是能活动的。有些线虫虫体非常瘦弱，如从某一高度扔下，土样中的毛刺线虫（Trichodorus）可能会掉死。土样被反复摔打，里面线虫死亡率会非常高。采集毛刺类线虫的最好方法是将一铝罐插入土内，然后轻轻拔出土罐将里面的土芯带出。这个铝罐可以保护线虫直到被分离。为了防止土壤中线虫在贮存期间发生变化和解决植物检疫有关问题，土样在分离或提取线虫前也可采用固定的办法，将 100ml 福尔马林40％的甲醛加 10