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淡水鱼皮胶原蛋白提取优化工艺研究( Ⅱ)周爱梅 ,张培丽 ,刘欣 ,赵力超 ,林命春 ,蔡凤明(华南农业大学食品学院 ,广东广州 ,510642)摘 要 采用正交实验研究了罗非鱼 、鳙鱼 淡水鱼皮胶原蛋白提取优化工艺研究( Ⅱ) 周爱梅 ,张培丽 ,刘 欣 ,赵力超 ,林命春 ,蔡凤明 (华南农业大学食品学院 ,广东广州 ,510642) 摘 要 采用正交实验研究了罗非鱼 、鳙鱼 、草鱼和鲫鱼 4 种淡水鱼皮胶原蛋白提取的优化工艺 ,同时利用 eBio Service 系统分析了纯化胶原蛋白的分子质量和组成 。实验结果表明 ,4 种淡水鱼皮胶原蛋白的最佳提取工艺各 不相同 ,在最 佳 提 取 条 件 下 , 其 胶 原 蛋 白 提 取 率 依 次 为 36157 % 、30158 % 、35114 % 、45117 % ; 而 得 率 依 次 为 8193 % 、8152 % 、9103 % 、6150 % 。eBio Service 系统分析显示 4 种鱼皮所提取的胶原蛋白电泳区带都与 I 型胶原 蛋白的特征相同 ,分子质量范围为 110～130 ku , 纯度约为 82 %～85 % 。 关键词 鱼皮 ,胶原蛋白 , 提取 鱼皮作 为 试 验 原 料 ; NaCl 、NaO H 、乙 酸 、柠 檬 酸 、L 2 羟脯氨酸 、N , N2 亚甲叉双丙烯酰胺等均为市售分析 纯或生化级试剂 。 112 试验方法 11211 胶原蛋白含量的测定 1 ,2 鱼皮中的胶原蛋白提取后 ,经脱盐处理后再冷冻 干燥 ,测定时取一定的冷冻干燥样品测定其羟脯氨酸 的含量 ,再乘以羟脯氨酸和胶原蛋白的换算系数 1111 即得胶原蛋白含量 。其中羟脯氨酸标准样品的回归方 程为 : Y = 01074 8 x + 01018 7 ( R2 = 01997 6) 11212 鱼皮胶原蛋白提取工艺的优化 3 ,4 由前期试验可知 ,罗非鱼 、鳙鱼 、草鱼和鲫鱼 4 种 鱼皮最好的提取胶原蛋白工艺 为 先 用 NaO H 浸 泡 , 再用 NaCl 浸 泡 ; 最 佳 提 取 剂 为 乙 酸 , 提 取 温 度 为 20 ℃。为了确定 NaO H 、NaCl 和乙酸最佳的浓度 、料 液比以及浸提时间 , 设计 9 因 素 4 水 平 的 正 交 试 验 (表 1) ,对胶原蛋白提取工艺进一步优化 。 胶原蛋白含量占鱼体总蛋白的 25 %～ 30 % , 主 要分布于鱼鳞和鱼皮中 ,且鱼鳞 、鱼皮中的粗胶原蛋 白约占 80 % ,而一般水产加工中都将鱼鳞 、鱼皮作为 废弃物扔掉 。因此 ,充分 、合理地利用废弃物鱼鳞 、鱼 皮提取胶原蛋白不仅可推动水产加工业的发展 ,而且 能化废为宝 、减 少 环 境 污 染 。本 课 题 组 在 前 期 研 究 中 ,以罗非鱼 、鳙鱼 、草鱼和鲫鱼鱼皮为原料 ,对不同 工艺提取 4 种鱼皮胶原蛋白的影响进行了较为系统 的研究 ,找出了其最佳的提取工艺 。为了进一步提高 胶原蛋白的提取率和得率 , 本 文 在 前 期 研 究 的 基 础 上 ,设计正交实验对胶原蛋白的提取工艺进行优化 , 同时采用 eBio Service 系统对经纯化处理后的胶原蛋 白分子组成及分子质量进行分析 ,以为开发淡水鱼皮 胶原蛋白提供进一步的有益参考 。 材料与方法 1 111 材 料 新鲜的罗非鱼 、鲫鱼 、鳙鱼和草鱼购于市场 ,取其 表 1 正交实验因素 、水平表 L8 ( 49 ) 因 素 水 平 NaO H NaCl 乙酸 A B C D E F G H I 浓度 / mol·L - 1 料液比 ( g∶mL ) 浓度 / mol·L - 1 料液比 ( g∶mL ) 时间/ h 料液比 浓度/ % 时间/ h 时间/ d 1 2 3 0105 011 012 3 6 9 1∶5 1∶10 1∶15 215 5 715 3 6 9 1∶5 1∶10 1∶15 012 015 1 1 2 3 1∶40 1∶50 1∶60 4 013 12 1∶20 10 12 1∶20 115 4 1∶70 11213 鱼皮胶原蛋白的纯化 5 ,6 根据文献 5 ,6 方法并进行改进 ,透析条件为 :采 用 0102 mol/ L 、p H 810 的 Na2 HPO4 缓 冲 液 进 行 透 析 ,透析液的量为透析袋内溶液体积的 15～20 倍 ,透 析过程中每 4 h 更换透析液一次 ,透析 34 h 。 11214 SDS2PA GE 电泳条件 7 ～9 电泳试剂配制按文献 7 的方法进行 ,电泳方法 第一作者 :博士 ,副教授 。 收稿日期