临床微生物学检验的课件.pptVIP

细菌生化反应及其结果的判断： 细菌的生化反应主要检测细菌对于各类化学物质（碳水化合物、氨基酸及蛋白质、无机盐类等）的代谢能力以及酶类的存在与否等生化特性。这些反应能够导致反应体系的PH值变化或产生显色物质，加入合适的酸碱指示剂或显色剂就可以反映出来。 细菌鉴定自动分析过程 ： 仪器对生化反应结果的判断 根据细菌生化反应的显色原理利用比色法进行分析。每一种反应阳性和阴性的色谱值均不同，据此可以设定每种反应的临界值。机器由分析程序控制，自动读取通过微孔的透射光，分析其色谱值并与临界值相比较，判断出反应结果是阳性还是阴性。 编码的转换与分析 系统将每种反应的结果转换为八进制的5位数编码，将该编码与系统内的细菌数据库比较，查找出对应的细菌及其可能出现的概率。如果编码无法准确区分细菌，系统自动检索相关的补充试验将其进一步鉴定。 报告结果：系统自动将出现概率最大的细菌作为鉴定的结果报告。 ??? 药敏试验的原理 基本概念 抗菌药物敏感性试验（AST，简称药敏试验）：用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。常用最低抑菌浓度（MIC）表示，即体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度。通常根据MIC结合常用剂量时体内该药所能达到的血药浓度，划定细菌对各种抗生素敏感或耐药的界限，给出S（敏感）、I（中介）、R（耐药）等定性的结果，方便临床用药。 药敏试验的目的 检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理用药。 （2）??? 用于流行病学调查及院内感染的监控，控制和预防耐药菌株的流行。 （3）??? 为经验用药提供参考依据。 常用的药敏测定方法 扩散法（纸片法）：手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上广泛使用此法。 E测定法（E test）：与扩散法相似，但药物包被于长塑料条上，能够精确测定MIC值。适于一些特殊病原菌的药敏测试，但价格较为昂贵。 稀释法：有琼脂稀释法和液体稀释法，通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断其最低抑菌浓度（MIC）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏试验的方法。 药敏试验和抗菌药物的规则 抗菌药物的选择原则 针对不同类别的细菌，应该有选择的进行抗菌药物敏感试验。不同细菌需要测试的药物可能有所不同。如红霉素用于葡萄球菌的测试而不用于肠杆菌的测试。 （2）?不需要对每种抗生素均进行测试。选择的药物应该为各类抗生素的代表性药物。 （3）? NCCLS（美国临床实验室标准委员会）将测试药物根据不同细菌 分为4组。A组为首选药物必须常规报告；B组为与A组平行的药物，但可以选择性报告；C组为补充药物，当对A组、B组药物呈现多重耐药时必须报告；D组为用于尿路感染测试的药物。 （4）? 每种药物需要测试的药物浓度各不相同，对应的敏感或耐药的MIC值也不相同，NCCLS在经过认真地验证后给出了相应的判断标准。 药敏试验结果的解释 MIC：体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度，临床医师可以根据MIC确定药物剂量。通常达到稳态的血药峰浓度（Css）max应为MIC的4-8倍，重症感染以大于8倍为妥。 （2） 为方便临床给药，根据MIC提供一个定性的结果是必要的。临床医师根据敏感、中介、耐药的提示结合MIC可以方便地制定用药方案。 敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌药物血液浓度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。 中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。 ?耐药（R）：表示该药物对细菌的MIC值等于或高于常规剂量下药物的血液浓度或组织浓度，细菌不能被该种药物抑制。 药敏试验自动分析的原理 细菌在药物微孔中的生长情况： 每种抗菌药物按照NCCLS所规定的三个倍比稀释测试浓度，分别包被在3个微孔中，微孔中另外还包被有适于细菌生长的培养基。待测菌制备成菌悬液接种于药物微孔中。细菌如果在某孔内生长，表示该孔的药物浓度不能抑制细菌的生长，该孔内呈现浑浊，透光度明显下降。反之，该孔内为澄清，透光度下降不显著。 2、机器由分析程序控制，利用透射光自下向上逐孔检测。光敏元件自动接收透射光。接收到的透射光强度值自动与系统设定的临界值相比较，大于临界值判断为细菌不生长，该孔的结果为阴性；小于临界值则判断为细菌生长，该孔的结果为阳性。 3、MIC值的判断： 每种药物的5个测试孔中，结果为阴性的最低浓度孔的药物浓度即为最低抑菌浓度（MIC）。若5个测试孔结果均为阳性，最低抑菌浓度（MIC）应该大于最高浓度孔的药