急性白血病论文：急性白血病患者骨髓中C×43的表达及其与耐药相关性研究.docVIP

急性白血病论文：急性白血病患者骨髓中C×43的表达及其与耐药相关性研究 【中文摘要】近年来，通过常规化疗，骨髓移植治疗，白血病的预后已大为改观，但由于多药耐药的产生，仍有一部分患者很难缓解或缓解后很快复发。白血病细胞是恶性克隆性增殖的造血细胞，其生存、分化、增殖均与骨髓基质细胞密切相关，Cx43是骨髓基质细胞中主要的间隙连接蛋白, Cx43表达减少或缺失与多种肿瘤的发生、发展、转移密切相关，Cx43介导的间隙连接细胞间通讯(GJIC)对白血病细胞增殖、凋亡和药物敏感性等方面起着重要的调控作用，目前有关Cx43在肿瘤耐药中的作用及具体机制仍不十分清楚，还有待于进一步研究。耐药的产生是多因素、多步骤、多基因共同作用的结果，大量研究已证实P-糖蛋白(P-gp)及环氧化酶(COX-2)在多种恶性肿瘤中过度表达，参与多药耐药的产生。本实验采用SYBRGreen实时定量反转录聚合酶链反应(SYBR–RT-PCR)方法,检测不同病程急性白血病(AL)患者骨髓细胞Cx43、P-gp、COX-2 mRNA的表达,并对36例初治患者进行随访观察,进一步探讨Cx43与急性白血病的发生、发展和耐药的关系。通过研究骨髓基质细胞与肿瘤细胞耐药之间的相互作用机制为难治性血液肿瘤的诊断及治疗提供可能的手段。方法本实验符合张之南的诊断治疗标准分为初发组、完全缓解组、复发组、正常对照组4组，检测以下相关指标的变化：（1）体外分离培养初发组、完全缓解组、复发组、正常对照组骨髓基质细胞（BMSCs），采用实时荧光定量PCR（Real-timePCR）检测Cx43的表达。（2）实时荧光定量PCR（Real-timePCR）直接检测初发组、完全缓解组、复发组、正常对照组骨髓单个核细胞中Cx43、P-gp、COX-2mRNA的表达。结果1、Real time -PCR方法检测四组实验样本的骨髓基质细胞Cx43mRNA，初发、复发急性白血病组的表达明显低于正常及化疗后完全缓解组(p0.01)。2、Real time -PCR方法直接检测骨髓单个核细胞Cx43、P-gp、COX-2 mRNA的表达显示：初发、复发AL患者Cx43 mRNA表达水平较对照组及完全缓解组低,差异均有统计学意义(初治组分别为P=0.01、0.004；复发组均为P0.001)；完全缓解组Cx43 mRNA表水平与对照组相比,差异无统计学意义(P=0.185)；AL初治患者骨髓细胞中P-gp、COX-2mRNA的表达均高于对照组,差异有统计学意义（P分别为0.035、0.019）；AL难治复发患者骨髓细胞中P-gp、COX-2mRNA的表达均高于对照组,差异有统计学意义（P均＜0.001）；3、AL患者骨髓细胞中Cx43和P-gp、COX-2 mRNA的表达均呈负相关性，相关系数分别为r=-0.544、r=-0.406, P值0.001。4、36例AL初治患者随访4个月,死亡8例,生存28例,死亡患者Cx43 mRNA表达低于生存患者,差异有统计学意义(t=2.16,P=0.042)。结论1、本实验从骨髓基质细胞和单个核细胞两种手段检测了不同病程CX43的表达，结果趋势一致，为今后临床研究提供了一种可能的方便、简单的检测手段。2、初发、复发难治AL患者骨髓单个核细胞中Cx43mRNA的表达下调，同时多药耐药基因P-gp、COX-2 mRNA的表达上调；提示Cx43表达增高是预后良好因素，Cx43与AL的发生、发展、预后及化疗耐药密切相关。3、Cx43与肿瘤细胞间的相互作用可能通过下调P-gp、COX-2的表达实现的，进而影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。 【英文摘要】BackgroudIn recent years, through the conventional chemotherapy and bone marrow transplanttreatment, the prognosis of leukemia has changed greatly, but because the generation of drug-resistant, it is difficult for a part of patients to relieve or relapse after remission soon after.Leukemia cell is the proliferation of malignant cloned hematopoietic cells, its survival,differentiation, proliferation and bone marrow stromal cells are closely related. Cx43 is the majorconnecti