1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞.PDFVIP

中国科技论文在线 实用肿瘤杂志2003年 第 18卷 第 1期 · 27 · c—raf一1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞 放射敏感性的影响 任庆兰 ，李少林 (重庆医科大学基础医学院，重庆 400016) 摘要 ：目的 探讨癌基因c—raf一1的反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响。方法 设立c—raf一1正 义寡核苷酸组和非处理组 (仅加入等量的脂质体 ，作对 照 ，用 RT—PCR检测卵巢癌细胞处理前后 c—raf一1表达水平 的变化 。用平板克 隆形成试验检测人卵巢癌细胞株 SKOV3在脂质体 craf一】反义寡核苷酸作用前后受 。C0 射线 不 同剂量照射后 的集落形成率 。结果 c—raf一1反义寡核苷酸能抑制c—raf一1癌基因的表达 ，经脂质体介导的c—raf一1 反义寡核苷酸作用 的卵巢癌细胞经 射线照射后其集落形成率较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组 明显下降 (P O．01)，而转染c—raf—l正义寡核苷酸组的集落形成率与单纯照射组相比无明显差异 (P0．05)。结论 c—raf—l反 义寡核苷酸通过抑制 c—raf一】的表达降低人卵巢癌细胞株 SKOV3放射抗拒性 。该作用可能与 c—raf一1反义寡核苷 酸抑制了引起细胞辐射抗拒的细胞信号转导途径有关。 关键词 ：卵巢肿瘤 ；脂质体 ；寡核苷酸类 ，反义；辐射耐受性 中图分类号 ：R737．31 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—1692(2003)01—0027—03 放射治疗在肿瘤治疗中占有重要地位。据统计 ， 1．3 用脂质体介导转染寡核苷酸 将数 目为 2× 在我 国约有 70 的恶性肿瘤病人在病程 的某一 阶 10 的细胞接种于 6孔培养板上 ，约 24小时后 ，40％ 段需接受不同方式的放射治疗 。卵巢癌是威胁妇女 ～ 60 细胞融合 ，此时将脂质体和寡核苷酸按 1：1 生命 的恶性疾患 ，而该肿瘤细胞对放射治疗具有一 质量 比分别加入 1p．m 的c—raf一1正义和反义寡核苷 定的放射抗拒性是疗效不佳的重要原 因之一 。据文 酸中，参照 lipofectin说明书 (GibcoBRL公司)进行 献报道 j『，c—raf一1蛋 白是引起辐射抗拒信号转导通 转染。转染时用无血清、无抗生素 的RPMI一1640培 路中的重要环节 ，因此本文选择癌基因c—raf一1的反 养液 6小时后 ，去除含脂质体一寡核苷酸的转染液， 义寡核苷酸干预辐射信号途径 ，观察其对人卵巢癌 换用含 20％小牛血清的RPMI一1640培养液继续培 细胞株 SKOV3放射敏感性的影响 ，深入探讨产生 养 48小时。 辐射抗拒的机制 ，为提高临床放射 治疗疗效提供实 1．4 RT—PCR检 测转染寡核 苷酸前 后 SKOV3的 验依据 。 c—raf一1表达 用 Trizol提取转染寡核苷酸前后 SKOV3细胞 的总 RNA。用分光 光度 计对溶解 于 l 材料与方法 DEPC的RNA定量 ，并将 3 gRNA进行 1．296／琼 1．1 寡核苷酸 c—raf一1正义寡核苷酸序列为 ：5一 脂糖凝胶 电泳，检测RNA 的完整性 。取 5x／gRNA ATGGAGCACATACAGGGA一3；c—raf一1反义寡核 为模板 ，逆转录合成 cDNA，用 c—raf一1的特异引物 苷酸 序 列 为：5一TCCCTGTATGTGCTCCAT一3。