猪α干扰素／白细胞介素2基因的融合表达及活性研究-畜牧兽医学报.pdfVIP

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2017-12-22 发布于天津
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猪α干扰素／白细胞介素2基因的融合表达及活性研究-畜牧兽医学报.pdf

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猪α干扰素／白细胞介素2基因的融合表达及活性研究-畜牧兽医学报

畜牧兽医学报，（）：２００９４０２２４８２５５　犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪猪干扰素／白细胞介素基因的 α ２融合表达及活性研究  闫若潜，吴志明，张志凌，盛敏，刘光辉，赵明军　（河南省动物疫病预防控制中心，郑州４５０００８）摘要：为了研究高效广谱的猪基因工程抗病毒制剂，作者采用重叠延伸（，ＰＣＲＳｌｉｃｉｎｂｏｖｅｒｌａｅｘｔｅｎｓｉｏｎＰＣＲ　ｐｇｙｐ）方法通过一基因柔性接头（）（）将猪干扰素（，）与猪白细胞ＳＯＥＰＣＲｌｉｎｋｅｒＧＳＰｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎａｌｈａ犘狅犐犉犖 ４３ α ｐ α 介素（，）成熟肽基因连接，构建成嵌合基因，并克隆入２Ｐｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ２犘狅犐犔２犘狅犐犉犖犾犻狀犽犲狉犘狅犐犔２ α ＧＥＭＴＥａｓ载体，将犘狅犐犉犖犾犻狀犽犲狉犘狅犐犔２嵌合基因亚克隆入ＱＥ３０表达载体进行原核表达。通过尿素变ｐｙ α ｐ性、复性液复性、溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白（）进行纯化。采用细胞病变ＰＢＳｒＰｏＩＦＮｌｉｎｋｅｒＰｏＩＬ２ α 抑制法检测ｒＰｏＩＦＮｌｉｎｋｅｒＰｏＩＬ２蛋白中的ＰｏＩＦＮ在不同细胞系上对不同病毒增殖活性的抑制作用；分别采 α α 用ＭＴＴ法和ＰｏＩＬ２ＥＬＩＳＡ试验方法检测ｒＰｏＩＦＮｌｉｎｋｅｒＰｏＩＬ２蛋白中ＰｏＩＬ２的生物学活性。结果表明成功 α 构建并克隆犘狅犐犉犖犾犻狀犽犲狉犘狅犐犔２嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中得到高效表达，表达的ｒＰｏＩＦＮｌｉｎｋｅｒ α α ＰｏＩＬ２蛋白相对分子质量约３６．７ｋｕ，蛋白经纯化后纯度在９６％以上。ｒＰｏＩＦＮｌｉｎｋｅｒＰｏＩＬ２蛋白在细胞上具有 α 与单一蛋白相近的抑制病毒增殖活性，其中在细胞上抗的活性单位为４ · ｒＰｏＩＦＮ ＰＫ１５