Ｃ型产气荚膜梭菌β毒素的提纯与鉴定.pdfVIP

2.A.hemeH,ElIdrissietal.VeterinaryIvb-bid,gy,1992,31.99一99 3.AldnaruitoIMed.Sci,Biol,1968,21,379一391 4.中华人民共和国兽用生物制品质量标准,1992 5.曹尚泽 兽医微生物学及免疫学技术 6.MethaR,eta].lmernational]ourralofFloodMwmbio4y,1989,9.45一50 7.IdriwiAH.ph.D.thesis,universitt,ofMinnesotast.Paul.USA.1991 a衬、，合 C型.产气荚膜梭菌R毒素的提纯与鉴定 一 张存帅 辞民权 中国兽药监察所 北京 100081 以C型产气英膜梭菌C59-2株肉肝胃酶消化汤培养物为材料，经离心，蔡氏滤器除菌后，滤液用硫酸胺沉 淀浓缩。浓缩物用PBS(PH7.4)溶解后，经SephadexC100(1.0x100cm)层析柱进行毒素蛋白的初步纯化。 收集蛋白质部分，经检验确认主要含有A 素的收集物再经SephadexG200(2.5x100cm)层析柱进行第二次提 纯。收集蛋白质部分，进行包括小白鼠MID侧定、小白鼠中和试验、琼脂扩散试验、SD,IPACE电泳和West- erblol等生物活性测定，结果表明提纯的A毒素不仅具有高特异性的生物活性，而且纯度较高。 关健词 C型产气英膜梭菌 A毒素提 PurificationandIdentificationof卜 tridiuntPerfringenestypeC ZAangCuashuai,XueM-7.i (岛之砚ControlInstituteofVeterinaryDrug,Beijing100081) Theculturesofpepsin-digestdebeefandliverbrothofClostridiumperfringeristypeC(C59-2)。 usedinthis study.AfterthecellshadbeenremovedbycentrifugationandfiltrationthroughSeitzfitt二，thecollectionwasconcert- tretedbyprecipitationwithammoniumsulfate.IheconcentratedtoxinwaspurifiedfirstthroughSephadexG100column (1.0x100cra).TheprotiencollectionsmainlyContainingAtoxinidentifiedbytestswaspurifiedagainthrough SephadexG200column(2.5x100cm).Theproteinocllectionsvim assaydebydetectionoflethalactivity,neurtaliza- tiontest,Agerdiffusiontest,SDSPAGEandWesterblot.Theresultsshowedthacthepurifiedtoxinwashighlypuri- fied3(toxinwithspecificbiologialactivity. KeywordsClostridiumperfringenstypeC 3(toxinpurificationandIdentification C型产气英膜梭菌是引起羊碎死、羔羊、犊牛和仔猪痢疾的主要病原。C型产英膜梭菌主要 产生。和日毒素，引起高度致死性坏死性肠炎(t)。自从Oakley于1943年对其产毒情况首次报道 以来(2)，该毒素的致病机理已被人们所认识，并在疾病的防预方面也取得了巨大成就。但在疾 病的诊断和病原的定型方面仍停留在细菌分离与血清中和试验的方法上，需时长，方法繁琐。探 索简便易行的诊断方法，是当今控制该病首要解决的问题之一。为此我们进行了日毒素的提纯与 鉴定。为建立新的免疫诊断方法提供材料和依据。 材料与方法 材料: