第13章细胞增殖调控.pptVIP

SCF介导的CKI的降解作用 靶蛋白如CKI的磷酸化，被始终为激活状态的SCF识别，SCF在E1和E2的帮助下，将多个泛素分子转移到靶蛋白上，泛素化的靶蛋白立即被识别，在蛋白酶体中降解。 4 CDK抑制蛋白（CKI, CDK inhibitor protein）与周期调控 CKI如p27，p21 p53：一种抑癌基因。 DNA的损伤可以通过p53激活p21的表达，使细胞不能进入S期，细胞周期阻滞于G1期，以修复损伤的DNA,如不能修复则启动凋亡程序。 p53的突变使这种刹车机制失灵，细胞突变率增加，极易发生癌变。 Mdm2与p53的结合，使p53在蛋白酶体中降解 p53 磷酸化处于激活状态，与Mdm2分离，使p53 积累 激活的p53与p21(CKI)基因的调控区结合，使p21转录、翻译 p21与G1/S –CDK和S-CDK结合，使其失活。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 13.3 细胞周期调控 细胞周期的运转需要控制，保证有序的事件依次完成。细胞长到一定大小——DNA复制——DNA复制完成——有丝分裂。 细胞周期的检验点（checkpoint） G1检验点（启动点或限制点，靠近G1末期） 在酵母中称start点，在哺乳动物中称R点(restriction point)， 控制细胞由静止状态的G1进入DNA合成期。 相关的事件包括： DNA是否损伤？ 细胞内环境是否适宜？ 细胞体积是否足够大？ G2检验点（在G2期结束点） 是决定细胞一分为二的控制点 相关的事件包括： DNA是否正确复制和是否复制完全？ 细胞体积是否足够大？ 环境因素是否适合细胞分裂？ 中期检验点（纺锤体组装检验点，在中期末）： 任何一个着丝点没有正确连接到纺锤体上，引起细胞周期中断。 13.3.1细胞周期调节因子－MPF MPF  - 成熟促进因子(maturation-promoting factor) - M期促进因子(M phase-promoting factor) - 有丝分裂促进因子(mitosis-promoting factor) 1 MPF的发现 P. N. Rao和R. T. Johnson (1970年) 将Hela细胞同步于M期，然后与处于不同时期的间期细胞混合，在灭活仙台病毒介导下，诱导细胞融合。 将处于M期的细胞与处于不同时期的间期细胞融合, 间期细胞发生了形态各异的染色体凝缩, 这种现象称为早熟染色体凝缩(premature chromosome condensation, PCC)。 此种染色体称为早熟染色体。 PCC 单线状 粉末状 双线染色体状 （a）M+G1 (b) M+S (c) M+G2 1971年， Y. Masui和C. Markert 用诱导成熟的非洲爪蟾卵做细胞质移植实验，发现在成熟的卵细胞质中，存在一种物质，可以诱导卵母细胞成熟，称为成熟促进因子，即MPF。 研究细胞周期调控爪蟾卵母细胞 爪蟾的卵母细胞处在减数分裂 I的M期之前（ G2） 在孕酮的作用下，卵母细胞发育为成熟的卵细胞处在减数分裂II的M期（M II） MPF被发现后，不少学者便着手MPF的纯化工作。 直到1988年，Maller实验室的Lohka等以非洲爪蟾卵细胞为材料，分离获得微克级的MPF，证明主要含有p32和p45两种蛋白。这二者结合后，表现出蛋白激酶的活性，因此证明MPF是一种蛋白激酶。 Paul Nurse以裂殖酵母为材料和L. Hartwell以芽殖酵母为材料，分别发现并分离鉴定了与MPF具有相似功能的蛋白激酶p34cdc2和p34cdc28，而且这二者本身不具有激酶活性，只有与特定的蛋白质结合后，才表现出激酶活性，如必须与p56cdc13结合。 Tim Hunt以海胆卵为材料发现蛋白含量随着细胞周期变化的周期蛋白（cyclinB）。 2001年10月8日，美国人Leland Hartwell、英国人Paul Nurse、Timothy Hunt因对细胞周期调控机理的研究而荣获诺贝尔生理医学奖。 两个不同的蛋白亚基组成的异质二聚体。 实质是一种使多种底物蛋白磷酸化的蛋白激酶，由细胞周期蛋白(cyclin)与周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent protein kinase, CDK)形成的复合物。 2 MPF的结构 MPF = CDK1复合物 = CDK1(p34cdc2) + cyclin B。 p3