hnf4αp1与p2在胃型胃癌、肠型胃癌及肠上皮化生胃粘膜中的表达.docVIP

精品论文 参考文献 HNF4αP1与P2在胃型胃癌、肠型胃癌及肠上皮化生胃粘膜中的表达 1 湖南省马王堆医院消化内科湖南长沙410016；2 中南大学湘雅医院研究生院湖南长沙410008 摘要：目的：检测肝细胞核因子4alpha;（hepatocyte nuclear factor 4alpha;，HNF4alpha;）P1和P2蛋白在胃型胃癌、肠型胃癌、炎性胃粘膜及肠上皮化生胃粘膜中的表达，分析HNF4alpha; P1和P2与胃癌及胃粘膜肠上皮化生发生发展的内在联系。方法：以免疫组织化学方法检测HNF4alpha; P1和P2蛋白在胃型胃癌、肠型胃癌、炎性胃粘膜及肠上皮化生胃粘膜中的表达及细胞内定位。结果：HNF4alpha;P1和P2在切片组织中的表达均定位于细胞核。HNF4alpha; P1蛋白在胃型胃癌表达显著低于肠型胃癌，炎性胃粘膜中表达显著低于肠化胃粘膜，差异均具有统计学意义（p＜0.05）。HNF4alpha; P2蛋白在各组大部分切片中均有表达，4组两两相比均无统计学差异。结论：HNF4alpha; P1蛋白在胃型胃癌和炎性胃粘膜中低表达，在肠型胃癌和肠化胃粘膜中高表达。HNF4alpha; P1表达升高可能与肠型胃癌及肠上皮化生的发生相关。 关键词：胃型胃癌；肠型胃癌；HNF4alpha;；肠上皮化生 胃癌是国际、国内最常见的恶性肿瘤之一，根据近期的统计报告，我国胃癌发病率为36.21/10万，远高于全球同期水平，位列全国人口恶性肿瘤发病率第2位，此外，我国胃癌死亡率为25.88/10万，为所有恶性肿瘤的第3位致死病因[1]。肝细胞核因子是一种转录因子，在分化成熟的肝细胞中高表达，主要在转录水平起调控作用，调节肝脏基因特异性表达，并参与调节细胞分化和代谢。近年来的研究表明HNF4alpha;在肝细胞发育和分化中扮演重要角色，是维持肝细胞功能和生物学特征的重要转录蛋白[2-3]，参与合成白蛋白、解毒、能量代谢、胆汁酸和脂肪代谢等重要功能。HNF4alpha; 分为2类，共9种亚型，其中HNF4alpha;1-6亚型由 P1 启动子调控转录，统称为 HNF4alpha;P1；HNF4alpha;7-9亚型由P2 启动子调控转录产生，统称为 HNF4alpha;P2。HNF4alpha;参与多种恶性肿瘤发生、发展，但HNF4alpha; P1与P2在胃癌及胃粘膜中表达的研究报道仍较少，研究结果也存在较大差异。本研究旨在检测HNF4alpha; P1和P2蛋白在胃型胃癌、肠型胃癌、炎性胃粘膜及肠上皮化生胃粘膜中的表达，分析HNF4alpha; P1和P2与胃癌及胃粘膜肠上皮化生发生发展的内在联系。 材料与方法 一、病例和材料 收集本医院近5年肠镜下或手术中所取胃型胃癌肿瘤组织石蜡切片30份；肠型胃癌组织石蜡切片32份；以及炎性胃粘膜组织35份，肠化胃粘膜组织31份。所有病例取组织之前未进行放疗、化疗或生物治疗，切片均经过病理学医师确认。 二、试剂和检测方法 1.试剂：过氧化氢（H2O2）：上海国药公司产品。柠檬酸、柠檬酸三钠：上海国药公司产品。DAB染色试剂盒：丹麦DAKO公司产品。苏木精：北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组织化学抗体：鼠抗人HNF4Alpha; P1抗体、鼠抗人HNF4Alpha; P2抗体（R amp; D Systems，Minneapolis，MN），Cy3 - Goat Anti-Mouse IgG、Cy3 - Goat Anti-Rabbit IgG和Cy3 - Donkey Anti-Goat IgG：美国sigma公司产品。辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗小鼠/兔IgG：丹麦DAKO公司产品。 2.免疫组织化学：石蜡切片 3%过氧化氢（H2O2）/PBS：20分钟。1 times; PBS洗涤3次，每次5分钟。切片置于0.01 M 柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0），煮沸30分钟，自然冷却。1 times; PBS洗涤1次。20% Goat Serum/PBS室温下封闭1小时。滴加一抗，4℃过夜。0.05% PBST洗涤3次，每次5分钟。滴加二抗，室温放置30分钟。0.05% PBST洗涤4次，每次5分钟。DAB反应：现配显色液，显微镜下观察，合适时间中止。苏木精衬染5分钟。梯度脱水、透明，中性树胶封片。 三、免疫组化结果判定 以出现棕黄色颗粒染色为阳性，计分标准：I类根据染色细胞数，小于5%计0分，5%-25%计1分，25%-50%计2分，大于50%计3分。II类根据着色强度，细胞