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水牛乳汁中乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定 段安琴 庞春英 朱鹏 邓廷贤 陆杏蓉 马小娅 梁莎莎 梁贤威 中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室 X 关注成功！ 加关注后您将方便地在 我的关注中得到本文献的被引频次变化的通知！ 新浪微博 腾讯微博 人人网 开心网 豆瓣网 网易微博 摘????要： 试验旨在从水牛 (Bubalus bubalis) 乳汁中分离培养水牛乳腺上皮细胞并对其进行鉴定, 建立经济、便捷的水牛乳腺上皮细胞分离方法。通过无菌收集高产奶水牛泌乳后期乳汁, 将其与PBS按2∶1 (V/V) 混匀离心;去除上层乳脂, 取带少量上清的沉淀, 与PBS按上述比例混匀再次离心;将脂肪层去除干净, 取沉淀上方1 mL上清及沉淀分别接种于细胞培养皿。通过细胞形态、免疫荧光、生长曲线测定、细胞接种活力、RT-PCR等对分离的细胞进行鉴定。结果表明, 试验成功从水牛乳汁的上清和沉淀中分离获得了水牛乳腺上皮细胞, 上清部分细胞和杂质较少;而沉淀部分则细胞和杂质较多。细胞呈典型鹅卵石样, 无成纤维细胞, 细胞活力好, 多处于分裂期。当细胞增殖高度融合时, 出现乳头状结构和分层生长现象。经免疫荧光鉴定, 分离获得的水牛乳腺上皮细胞表达上皮细胞标志蛋白——细胞角蛋白18。水牛乳腺上皮细胞的生长曲线呈S型, 符合一般生物学规律。细胞接种存活率的测定结果显示,