专题80 pcr技术-高考全攻略之备战2018年高考生物考点一遍过.docVIP

1．PCR原理 （1）细胞内DNA复制条件 条件 组分 作用 模板 DNA的两条单链 提供复制的模板 原料[来源:学§科§网Z§X§X§K] 四种脱氧核苷酸 合成DNA子链的原料 酶 解旋酶 DNA聚合酶 xxk.Com][来源:学科打开DNA双螺旋 催化合成DNA子链 能量 Z ATP 为解螺旋和合成子链供能 引物 RNA 为DNA聚合酶提供合成的3’端起点 （2）细胞内DNA复制过程 ①DNA的两条链是反向平行的，通常将DNA的羟基末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3’端延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物。DNA的合成方向总是从子链的5’端向3’端延伸。 ②在DNA的复制过程中，复制的前提是双链解开。在体外可通过控制温度来实现。在80~100 ℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。由于PCR过程的温度高，导致DNA聚合酶失活，后来耐高温的DNA聚合酶的发现和应用，大大增加了PCR的效率。 ③PCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行，需提供：DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。 2．PCR的反应过程 PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列成指数扩增。 3．实验操作 （1）PCR反应体系：缓冲液、DNA模板，四种脱氧核苷酸原料、热稳定的DNA聚合酶、两种RNA引物、水 （2）实验操作步骤 按照PCR反应体系配方配制反应液； 将PCR反应体系50μL用微量移液器转移到微量离心管（0.5 mL）中； 将微量离心管放到PCR仪中； 设置PCR仪的工作参数； DNA在PCR仪中大量扩增。 考向 PCR的反应过程 1．聚合酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述30多次循环：95 ℃下使模板DNA变性、解链→55 ℃下复性(引物与DNA模板链结合)→72 ℃下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是 A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的 C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比所需酶的最适温度较高 【参考答案】C 【试题解析】变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，解旋酶也具有该作用，A正确。复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的，B正确。延伸是合成DNA的过程，所以该过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种脱氧核糖核苷酸，C错误。PCR与细胞内DNA复制相比所需酶的最适温度较高，因为PCR过程需要高温变性，即使在复性时的温度也比较高，D正确。 2．利用PCR技术扩增目的基因的过程中，需加入 A．耐高温的解旋酶以保证DNA双链完全解开 B．2种己知核苷酸序列的引物以保证核苷酸链的延伸 C．4种足量的核糖核苷酸以保证目的基因的扩增 D．—定量的盐酸和氢氧化钠溶液以维持pH的稳定 【答案】B 1．PCR(多聚酶链式反应)技术是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，如图表示合成过程。下列说法错误的是 A．甲过程高温使DNA变性解旋，该过程不需要解旋酶的作用B．丙过程用到的酶在高温下失活，因此在PCR扩增时需要再添加C．如果把模板DNA的两条链用15N标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，循环3次后，在形成的子代 DNA中含有15N标记的DNA占25% D．PCR中由碱基错配引起的变异属于基因突变 2．在PCR反应中一个DNA片段在6次循环后大约有多少个这样的片段 A．8个 B．16个 C．32个 D．64个 3．小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因（目的基因）后再重组表达。下列相关叙述正确的是 A．设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列 B．用PCR方法扩增目的基因时需要知道基因的全部序列 C．PCR体系中G—C碱基对含量将影响使DNA解链的所需温度 D．PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶 4．下列有关DNA分子复制的叙述，正确的是。 A．DNA