薄层层析法.pptVIP

第八章 色谱分离技术第四节 薄层层析法刘耀玺 薄层色谱法（Thin-Layer chromatography. 简写 TLC）是一种简便、快速、微量的层析方法。一般是将某种吸附剂或支持剂均匀地铺在玻璃板上，形成一个薄层而进行层析的一种方法。广泛地用于化学成分的分离、精制、定性鉴定和含量测定。其原理与柱层析基本相同。 按其分离原理可分为吸附薄层层析和分配薄层层析两种。 一、吸附薄层层析 吸附薄层层析就是利用混合物中各成分对同一吸附剂吸附能力的不同，而使各成分达到分离目的层析法。凡柱层所用的吸附剂，均可用在薄层层析上，主要区别是柱层析所用的吸附剂粒度较大，一般为100-160目，而薄层层析用吸附剂的粒度较细，一般为160-250目。 1、吸附剂 薄层层析最常用的吸附剂有氧化铝和硅胶等。由于吸附剂的吸附能力有强有弱，吸附力弱的对化合物的吸附就不甚牢固。这就是吸附层析能分离不同物质的基本原理之一。 吸附力强弱与吸附剂本身的性质和被吸附的化合物的性质有关。 吸附剂：吸附剂的选择常是分离工作成败的关键。对吸附剂的选择与要求和吸附柱层析相同。要求小于250目，并要求粒度均匀。用于薄层层析的吸附剂或予制薄层一般活度不宜过高，以Ⅰ-Ⅲ级为宜，而展开距离则随薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细展开距离相应缩短。一般不超过10cm。否则可引起色谱扩散，影响分离效果。 2、展开剂 当吸附剂活性为一定值时（Ⅱ级或Ⅲ级），对多组分的样品能否获得满意的分离，决定于展开剂的选择。例如使用亲水性的吸附剂（如氧化铝和硅胶）时，若被分离成分极性较大，应选择吸附性较弱（活性较低）的吸附剂和极性较大的展开剂；若被分离的成分极性较小，亲脂性增强时，则应用吸附性强（活性高）的吸附剂和极性小的展开剂。 薄层层析常用的展开剂按极性大小(由小到大)排列如下: 戊烷石油醚四氯化碳苯乙醚氯仿乙酸乙酯丙酮乙醇甲醇水。 有时为了调整展开剂的极性可使用不同比例的混合展开剂，如氯仿—无水乙醇19∶1或1∶1等。对各种展开剂要求纯度高不含或少含杂质，必要时可重新蒸馏或经过特殊处理，方可应用。 3、被分离的成分 被分离的成分与吸附剂、展开剂共为层析中不可缺少的三个方面，彼此紧密相关。在指定的吸附剂和展开剂的条件下，各成分的分离情况直接与被分离成分的结构和性质有关。如对氧化铝和硅胶一类吸附剂，被分离的成分极性大，被吸附的作用也强。 看一个化合物的极性大小，不但要看特殊的功能基团，还要看化合物的整个分子极性大小，如整个分子极性基团越多，被吸附的性能就会更大，分子中双键多，吸附力强，共轭双键多，吸附力增大；在同系物中碳原子少的比碳原子多的吸附力强；在同一母核中，羟基处于能形成分子内氢键位置时，其吸附力弱于羟基不能形成氢键的化合物。 总之，全面考虑吸附剂、展开剂和成分三者间的相互关系，是分离效果成败的关键。 二、分配薄层层析 分配层析是利用混合物中各成分在固定相和流动相间不断地分配。由于各成分在两相间分配系数不同而达到分离的一种层析方法。分配层析的原理与吸附层析不同，它不是经过吸附解吸附、再吸附而解吸附的过程，而是通过在薄层上两相溶剂反复萃取，利用分配系数不同而达到分离目的。 分配薄层层析就是将一种叫做支持剂(或称载体)的固体粉末，铺在玻璃板上成为一均匀的薄层，支持剂上吸附着一种极性溶剂，作为固定相，另用一种与固定相不相混溶的极性较小的溶剂展开，这种溶剂称为流动相。由于各成分在两相间分配系数的不同，在固定相中溶解度大的成分移动慢，而在流动相中溶解度大的成分移动快，这样不断的移动过程中，使得各成分分离。 分配薄层层析主要因素也有以下三点: 1、支持剂:常用的支持剂有硅胶、微晶纤维素、硅藻土等。 硅胶、硅藻土和徽晶纤维素等，吸附大量水分后，失去了吸附性质，所以在板上只能起到支持的作用。 2、展开剂:分配层析所用的展开剂，多为两种以上的溶剂，按一定比例组成的溶剂系统。固定相是极性大的溶剂（如水、酸、碱）、不同pH缓冲液和非水而亲水性的溶剂如甲酰胺、三甲基甲酰胺、丙二醇、甘油、乙二醇等；流动相则为与水等不相混溶的极性小的溶剂，如石油醚、苯、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、醇类等。 选择展开剂的原则是:若被分离的成分亲水性较强时，则展开剂的极性也应较强。反之，成分亲脂性强，而展开剂的亲脂性亦应较强。 3、被分离的成分:虽然各种生物化学成分都可采用分配层析分离，但更适用于亲水性强而又略溶于亲脂性溶剂中的成分分离，如某些苷类、酚类。 三、薄层层析操作技术  包括吸附剂的选择与处理、薄层板的制备、点样、展开、显色、测Rf值及定量等操作程序 。 1、吸附剂的选择与处理 用于柱层析的吸附剂,如氧化铝、硅胶、硅藻土、聚酰胺、纤维素、淀粉、蔗糖等，一般均可